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液氮或低温冰箱中取出的大肠杆菌E.COLI_DH5_JM109HB101等在LB平板上划线37度过夜至长出单菌落.挑直径1-3毫米的单菌落可多个 接种到250毫升/3升锥形瓶 或80毫升/1升锥形瓶的SOB培养基. 培养基量不可再多会影响效率.在18度 150-250RPM 培养19-50小时没有冷却摇床的可在室温 但不可高于37度.OD600约0.4-0.8时停止培养 放在冰水中冷却10分 ...

1．在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。 2．用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个，3个阳性对照孔各加0.1m ...

1．1M Tris 溶液的配置 取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。 2．1M Tris－HCL Ph=8.0溶液的配置 取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0（需浓盐酸约8.5ml），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。 3. 0.5M EDTA溶液的配置 称EDTA－Na2 37.2g 先用140ml ddH2O溶解，加入14ml N ...

高MOI（ Multiplicity Of Infection，等于用于感染的病毒数目与细胞数目的比值）感染是生产蛋白的最好方法。这有两个原因。一是不用考虑DIP（Defective Interfering Particles，即只包装入部分基因组的病毒颗粒）的形成，因为关心的是细胞或者培养液中的蛋白；二是高MOI感染是最便于控制、重复性好的方法，以达到高的蛋白表达水平。 低MOI感染也可用于生产 ...

1．按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。2．吸去培养液，用PBS洗涤两次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前先离心）。3．每孔加60μl NAG染液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4小时。4．每孔加90μl终止液，混匀后置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长402nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。 ...

【实验目的】 通过标本制备和观察了解生物体细胞的无丝分裂、有丝分裂形态特征及生殖细胞的减数分裂过程。 【实验用品】 一、材料和标本 蛙血涂片、马蛔虫子宫切片和洋葱根尖切片、固定的蝗虫精巢。 二、器材和仪器 显微镜、擦镜纸、解剖针、眼科镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、培养皿、冰箱。 三、试剂 Carnoy固定液、70％乙醇、醋酸洋红染液、45％醋酸、二甲苯。 【实 ...

一、原位缺口翻译检测裂解的DNA片段1．取106经促调亡物质处理的细胞，用1％ BSA-PBS洗涤细胞后加入0.1ml FITC标记的抗CD4或抗CD8单克隆抗体，4℃ 20分钟。用1％ BSA-PBS洗涤细胞。置冰上。2．加入0.1ml 1％多聚甲醛，置冰上5分钟，加入60％（v/v）甲醇溶液，轻轻悬浮细胞，4℃固定细胞15分钟。4℃离心500×g 10分钟，去上清液。3．加入0.1ml 0.1 ...

感染悬浮细胞是使杆病毒系统生产蛋白的普遍方法。悬浮培养的细胞很容易从10ml扩大到100L。一般来说，悬浮的细胞在无血清的培养液中培养。这种培养液许多公司有售，比如Life Technologies、Hyclone、Biowhitaker、JRH Biosciences、Expression Systems等，用起来都不错，尽管由于细胞株和目的蛋白的不同，效果有所差异。 最好是将目的蛋白和细胞株用 ...

一、微量全血培养 (一)原理 人体外周血中淋巴细胞是成熟的免疫细胞，正常情况下处于G。期不再增殖。PHA(Phytohemagglutinin，植物血凝素)是人和其它动物淋巴细胞的有丝分裂刺激剂，它能使处于G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，进入细胞周期开始旺盛的有丝分裂。 人体微量全血培养是一种简单的淋巴细胞培养方法。此法采血量少、操作简便，在 PHA作用下进行短期培养即 ...

【实验目的】 通过细胞融合技术，初步了解染色体提前凝集标本制备原理、方法及间期细胞三种时相的提前凝集染色体特点。 【实验用品】 一、材料 人宫颈癌上皮细胞(HeLa细胞) 二、器材和仪器 显微镜、离心机、水浴箱、热吹风机、10ml刻度离心管、5(1/2) 针头注射器、试管架、染色槽、废液缸、吸水纸、擦镜纸、冰冻载玻片、香柏油瓶、记号笔、酒精灯。 三、试剂 5 ...

第一阶段：1．准备合适体积的由25%体积新培养液和75%旧培养液（即细胞原先适应的培养液）组成的混合培养液I。2．将细胞以通常分装时使用的最低分装密度的两倍分装到混合培养液I中。3．使细胞生长到通常培养时的较高密度，监测细胞生长参数。4．继续以步骤2中的密度分装细胞到新鲜的混合培养液I中，直到生长参数达到可以接受的水平。有时候分装一次就可达到要求。5．一旦细胞稳定下来，以通常使用的最低分装密度分装 ...

【实验目的】1.掌握相差显微镜的使用。2.掌握培养细胞的计数方法。3.掌握细胞融合的实验方法及融合率的计算。4.熟悉体外培养细胞的形态和生长状态的观察和判定方法。【理论基础】主要联系理论课“细胞的研究方法”一章的相关内容。1.细胞融合技术基本概念杂交细胞的基本概念：具有两个细胞的特性常用的促融方法：PEG、仙台病毒、电穿孔主要应用：基因定位、单克隆抗体制备等2.体外培养的细胞的两种状态(贴壁型细胞 ...

【实验目的】 了解电子显微镜的基本原理及电镜生物标本的制备方法和观察。 【实验用品】 一、材料和标本 家兔一只。 二、器材和仪器 H—600透射电子显微镜、S—450扫描电子显微镜、超薄切片机(AO型)、解剖镜、震荡器、恒温箱、临界点干燥器、JB一3型离子镀膜机、单面刀片、铜网、解剖器材。 三、试剂 乙醚、2.5％戊二醛(0.1mol／L(pH7.4)二甲砷酸钠缓冲液 ...

目的要求 使学生在了解电融合原理的基础上，学会掌握各种细胞悬液的制备及电融合过程的操作方法。 实验原理 游离的动物细胞或原生质体，置于电融合室中，在高频交流电场的作用下，细胞被极化，成为偶极子，造成细胞之间相互连接，如果施加的高频交流电压（既正弦波的P-P值）过高或作用时间过长，则细胞连接成串珠状，应适当控制以上条件，尽量是两细胞处于点接触状态；然 ...

【实验目的】 掌握微丝的染色方法，了解光学显微镜和电子显微镜下微丝的基本形态结构。 【实验用品】 一、材料和标本 盖片培养的成纤维细胞三片。 二、器材和仪器 光学显微镜一台、镊子一把、小平皿六个、载片三个、吸水纸、37℃恒温箱。 三、试剂 PBS(pH7.2)、2％Triton X—100液、M—缓冲液、3％戊二醛固定液、0.2％考马斯亮兰染液、100μg／ml的细胞松驰素B、 ...

1 了解细胞显微注射的基本原理2 掌握细胞显微注射基本技术显微注射技术是利用显微操作系统和显微注射技术将外源目的基因直接注入到受精卵的原核中，使外源基因整合到受体细胞的基因组内，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体动物的子宫内发育，从而获得转基因动物。它是目前基因转移效率较好的一种基因转移方法，可直接用不含有原核载体DNA片段的外源基因进行转移；外源基因的长度不受限制 可达100k ...

（一）融合剂细胞融合的方法有物理法，如电融合、激光融合，化学融合法和生物融合法，如仙台病毒，此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。聚乙二醇（PEG），在分子量为200～700时，呈无色、无臭的粘稠状液体，分子量大于1 000时，呈乳白色蜡状固体，能溶于水、乙醇及其他许多有机溶剂，对热稳定，与许多化学药品不起作用。用作细胞融合剂的聚乙二醇一般选用分子量为4 000者，常用浓度为50％，pH8. ...

【实验目的】 观察除了实验二～五以外的其它细胞器在光学显微镜和电子显微镜下的基本形态结构。 【实验内容】 一、三种细胞器的光镜切片 （一）高尔基复合体(Golgi Complex) 用镀银法染色的豚鼠脊神经节光镜切片:神经细胞因合成运输大量的蛋白质而含有发达的内质网和高尔基复合体，在低倍镜下观察，神经节的假单极细胞体被神经束分隔成群。神经细胞的胞体呈圆形或椭圆形。转换高倍镜观察，细胞中央不 ...

【实验目的】1．了解细胞电穿孔和电融合的基本原理2．学习电穿孔和电融合基本技术【实验原理】当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法，电穿孔已被广泛用于各种细胞类型，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，它还能作为注射方法（称为电注射）， ...

【摘要】 目的 提高HBsAg的表达量。方法 将CHO-C 28 细胞与NS-1细胞融合，用反向血凝法检测滴度。结果 融合后第11天，出现瞬时高表达，HBsAg表达量最高为1:2048，而对照仅为1:256。结论 融合法可以明显提高HBsAg的表达量，为进一步研究提供了证据。关键词 CHO-C 28 细胞 NS-1细胞 细胞融合 HBsAg表达量The study on enhancing exp ...