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细菌形态观察及单染色

一、实验目的1.了解简单染色法的原理,并掌握其操作方法。2.学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。3.巩固显微镜(油镜)的使用方法。4.初步认识细菌的形态特征。 二、实验原理 细菌个体微小,且较透明,必须借助染色法使菌体着色,与背景形成鲜明的对比,以便在显微镜下进行观察。根据实验目的不同,可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。简单染色法是最基本的染色方法,是利用单一染料对 ...

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细菌的分离与培养

实验目的: 掌握在各种培养基上的接种方法并观察生长现象。 实验材料: 菌种、普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基、接种环、接种针、酒精灯。 实验内容: 一、平板划线接种法(分离培养法) 原理:通过在平板上划线,将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开,使单个细菌能固定在一点上生长繁殖,形成单个菌落,以达到分离纯种的目的。若需从平板上获取纯种,则挑取一个单个菌落作纯培养。 用途: 分离出 ...

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细菌培养技术

给细菌提供适宜的条件,细菌即可以生长繁殖,形成具有一定特征的培养物,学习细菌培养技术可以纯化细菌,了解细菌的生长特征,并能进一步检测细菌生化反应、变异性,制备细菌抗原,深入进行分子生物学工作等。了解细菌的培养特征也有助于鉴别细菌。 细菌培养基的制备 培养基是用人工方法将适合细菌生长繁殖的各种营养物配制而成的营养基质,以供细菌培养使用。一般培养基的主要成份为蛋白质、糖类、盐类、水分等。另外还有一 ...

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棉铃虫病毒的扩增及分离纯化

一、目的与任务1. 学习病毒的分离纯化方法2. 通过病毒的分离纯化进一步理解病毒与宿主的相互关系二、基本原理杆状病毒是一类寄生于节肢动物的杆状的病原微生物。其宿主主要是鳞翅目、膜翅目和双翅目的昆虫 还有一些杆状病毒可以感染甲壳纲的节肢生物。杆状病毒常常包埋于由蛋白质组成的包含体基质(polyhedron/granulin)中。根据包含体的形态和病原微生物在(昆虫)细胞中的分布 可以将杆状病毒划分为 ...

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细菌的生化反应检测

不同细菌由于所含的酶系统不完全相同,因而对营养物质的分解能力及代谢产物亦不一致,据此,可用以鉴别细菌的种类。 一、单糖发酵试验 【原理】 单糖发酵是将葡萄糖,乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内,使其最终浓度为0.75~1%。并加入一定量酚红指示剂及小倒管,制成单糖发酵管,接种细菌经37℃培养18~24小时,若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄,若能分解甲酸有CO2和H2等气体形成,小倒管内则聚集 ...

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病原性球菌检查(二)

实验目的 1掌握病原性球菌培养物性状。 2掌握血浆凝固酶试验原理方法。 3掌握密集接种法,熟悉药物(如抗生素)抑菌杀菌原理并了解纸片法、试管法的试验方法及应用。 实验材料 1、菌种:金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌6~8小时肉汤培养物。 2、培养基:普通琼脂平板、肉汤培养基。 3、药品:青霉素溶液(50u/ml)、抗生素滤纸片。 4、器具:恒温箱、接种环、酒精灯、试管、无菌棉拭、无菌小镊子、无菌吸管、玻片 ...

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细菌分布及外界因素对细菌影响的检测

一、自然沉降法 检查空气中的细菌 【材料】 普通琼脂平板。 【方法】 取普通琼脂平板一个,打开皿盖,让培养基直接暴露于空气中,置于实验台上或需要测定的地方15~30分钟。盖上皿盖,用记号笔或蜡笔注明放置地点、实验日期和实验者班级、姓名等,放入37℃温箱培养18~24小时,观察细菌的生长情况和数量。并分析其意义。 二、倾注法检查水中的细菌 【材料与方法】 1 ...

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病原性球菌的检测

一、主要病原性球菌的形态、培养特征 【形态示数】 1. 葡萄球菌(革兰染标本):革兰染色阳性,为正圆形,呈葡萄串状排列,亦有单个散在分布。 2. 链球菌(革兰染色标本):革兰染色阳性,圆形或卵圆形,呈链状排列。 3. 肺炎双球菌(小鼠腹腔液涂片,HiSS染色):革兰阳性球菌,矛头状成双排列,平端相对,尖端相背。荚膜染色片中,菌体呈红色,菌体周围的荚膜呈淡红色或无色。 4. 脑膜炎双球菌(脑脊液涂片 ...

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细菌的分离培养、纯培养和生化试验

一、目的 掌握细菌培养、纯培养与基本微生物操作技能,了解生化试验原理、方法和意义。 二、实验内容 (一)细菌的分离培养:倾注法和划线法(倾注法:此法很少应用)本次试验采用前一种方法)划线法:融化普通琼脂培养基,倒平板,杂检。取1号菌如图1之一方法划线,37℃培养24h。图1 细菌分离培养的划线法图2 细菌纯培养划线方法(二) 钓菌和纯培养:观察菌落,选单个菌落,标记后,钓取目的菌落,如图2之一 ...

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病原性真菌实验

真菌是一大类不含叶绿素,无根、茎、叶,由单细胞或多细胞组成的真核细胞型微生物。大部分真菌对人类有益,能引起人类疾病的病原性真菌主要包括浅部真菌和深部真菌。 实验目的: 观察真菌的基本形态及菌落特点,了解浅部及深部真菌的检查方法。 实验内容: 一、常见单细胞真菌的形态观察(示教) 1、新型隐球菌墨汁负染色片:可见菌体呈球形,大小不一,有很厚的荚膜,包围在菌体周围,透明发亮,并可见发芽的菌体。 2、白 ...

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血清学实验—玻片凝集与肥达反应

【材料】 伤寒杆菌,甲、乙型副伤杆菌,痢疾杆菌诊断血清,载玻片,生理盐水等。 【方法与结果】 根据初步鉴定结果,用已知诊断血清作玻片凝集试验,如发生凝集,即可确定。如疑集阴性,应复查后再定。 (二)继续鉴定:根据需要可进一步作生化反应,血清学分型等鉴定。 【注意事项】 1. 作分离培养时宜取脓血便接种于鉴别培养基或选择培养基上。 2. 挑取可疑菌落时,每份标本可选取2~3个菌落,每个菌落接种一支双 ...

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枯草芽孢杆菌对棉花黄萎病的拮抗作用

实验目的: 进一步掌握无菌操作技术,加深对微生物之间互作的进一步认识 实验原理: 枯草芽孢杆菌分泌到体外的带谢产物能够抑制棉花黄萎病的生长 供试菌株 (1) 拮抗菌株: 枯草芽孢杆菌(冰箱保存) (2) 病原菌株: 棉花黄萎病菌(冰箱保存) 实验步骤 1. 培养基的制作 (1) PD培养液:(2) PDA培养基:查氏培养液:按上述配方配制查氏液体50 ml及固体胶培养基125 ml ...

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正交试验法在微生物培养条件优化选择中的应用

一.目的要求对于一个生物作用过程,其结果或产物的得到受到多种因素的影响。如发酵中,菌种的生物活性、酶的浓度、底物浓度、温度、pH 值、菌种生长环境中的氧气、二氧化碳浓度、各种营养成分的比例等。对于这种多因素的实验,如何合理地设计实验,提高效率,以达到所预期的目的是需要进行认真考虑和周密准备的。本实验运用正交实验法测定酵母用量、葡萄糖浓度、温度、磷酸盐用量这四个因素在不同水平对发酵过程和结果的影响, ...

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微生物菌种的保藏

一、目的和要求  1、了解各种保藏方法的优缺点及其适用的目标微生物。  2、学习并掌握几种常用的微生物菌种保藏方法。 二、原理  保藏微生物菌种的目的不仅要保存菌株的生命本身,而且还必须要尽可能地使菌株的遗传性状保持不变,同时保证其在整个保存过程中不被他种微生物污染。因此,选择一种能够长期有效且稳定的保藏微生物菌种的方法事关重要。  由于微生物种类繁多,且保存方法的难易程度不同,所以微生物菌种的保 ...

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简单染色法与革兰氏染色法

(一)细菌的简单染色法 1 目的 1.1 学习微生物涂片、染色的基本技术。 1.2 掌握细菌的简单染色法。 1.3 初步认识细菌的形态特征,巩固学习油镜的使用方法和无菌操作技术。 2 原理 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明,在普通的光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态 ...

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细菌的荚膜染色法

一、目的要求学习并掌握荚膜染色法二、基本原理荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质。由于荚膜与染料的亲和力弱,不容易着色;而且可溶于水,易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法(负染色法)染色,使菌体和背景着色,而荚膜不着色,从而在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜富含水分,制片时应自然干燥,不可以加热固定,避免加热蒸发,影响观察。 三、菌种:褐球固氮菌(Azotobacter chrooc ...

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细菌的特殊染色技术─芽孢染色 荚膜染色 鞭毛染色

一.目的要求: 学习掌握芽孢、荚膜和鞭毛染色原理和方法。 二.原理: 芽孢染色法是根据细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理,用不同的染料进行染色,使芽孢和菌体呈不同颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低,着色、脱色均较困难,当用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时,此染料可以进入菌体及芽孢使其着色,而进入芽孢的染料则难以透出。若再复染(蕃红液),则菌体呈红色而芽孢呈绿色。 观 ...

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放线菌形态观察

一、目的和要求1.学习并掌握观察放线菌的基本方法2.初步了解放线菌的形态特征 二、基本原理放线菌是指一类主要呈丝状生长和以孢子繁殖的革兰氏阳性细菌。 营养菌丝(基生菌丝):潜入培养基中。气生菌丝: 生长在培养基的表面。菌丝体 孢子丝:由气生菌丝分化形成。成螺旋形、波浪形或分枝状等。 孢子:常呈圆形、椭圆形或杆形。气生菌丝、孢子丝和孢子的形态、颜色常作为放线菌分类的重要依据。菌落特征:干燥、不透明、 ...

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包涵体的纯化和复性总结

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌? 细胞的破碎方法 1.高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。 2.玻璃 ...

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酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别

一、目的和要求1.观察酵母菌的出芽生殖方式,学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。2.掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。二、基本原理1.形态观察:酵母菌是不运动的单细胞真核微生物,通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖,有的分裂繁殖;有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。2.死活鉴定:美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时, ...

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