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        推荐 分子生物基本技术

        第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定第一节 概 述  把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。  质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达 ...

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        【原创】miRNA Northern Blot实验步骤

        miRNA Northern Blot实验步骤1975年,英国科学家埃德温·迈勒·萨瑟恩(Edwin Mellor Southern)创建了Southern Blot技术用于检测DNA。基于同样的原理,1977年由斯坦福大学的James Alwine、David Kemp和George Stark开发出了用于检测RNA的Northern Blot技术,至今仍然是一种经典的RNA检测技术。miRNA在不同组织中丰度变化大,例如,miR-133在骨 ...

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        【交流】DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论

        Southern印迹杂交(Southern blot)是1975年由英国人southern创建,是研究DNA图谱的基本技术,在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。早期的Southern印迹是将凝胶中的DNA变性后,经毛细管的虹吸作用,转移到硝酸纤维膜上。印迹方法如电转法、真空转移法;滤膜发展了尼龙膜、化学活化膜(如APT、ABM纤维素膜)等。利用Southern印迹法可进行克隆基因的酶切、图谱 ...

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        荧光定量PCR技术研究进展

        荧光定量PCR技术研究进展多聚酶联反应(PCR)可对特定基因进行扩增,因此被广泛应用于获取特定基因或基因片段及临床基因诊断等领域。早期最成功及普及的应用领域是获取某一目的基因,用于基因诊断有许多局限性,主要有两点,一是不能准确定量;二是由于太灵敏,容易交叉污染,产生假阳性。为克服上述不足,人们采取了许多方法,如杂交法、竞争法、酶联法及尿苷酶降解法等,但均不很成功,直到最近荧光能量传递技术(FRET)就用于PCR定量 ...

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        [教材]Gene VII中文版

        译者序近年来,我国生命科学和生物高技术领域的教学和科研正在迅猛发展,一支年轻的生物高科技教学和研究队伍正在茁壮成长。我国高校研究生教育亦形势喜人,招生数量逐年增加,招生专业和规模逐年扩大,许多知名大学都把以研究生教育和创新性科学研究为标志的高水平研究型大学定为奋斗目标。研究生队伍已成为高等学校中教学和科研工作中一支生机勃勃、不可替代的生力军。但是,目前我国高等学校(理、工、农、医院校)生命科学领域尚无一本系统的 ...

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        【原创】RNAi药物,一针一百万?

        RNAi药物,一针一百万?RNA interference RNA干扰 剂量 用量目前,用于动物实验的siRNA的通用剂量是10mg siRNA/公斤体重/每针。如果一个成人的体重是70公斤,那么一针就需要700mg siRNA。700mg siRNA多少钱?Qiagen目前的特别优惠价是0.15$/ug,Ambion的最低价格是0.19$/ug,Dharmacon的最低价格是0.12$/ug。按照这个价格,则700mg Qiagen的siRNA是1 ...

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        【旧帖整理】RNA提取与纯化:技术与经验---2004-2012年资源整合

        近日学习RNA提取与纯化技术,在园子里看了很多帖子,很有收获,遂将RNA提取与纯化方面在2004-2012年资源进行总结,整合为一贴,建立一个资源索引,与各位站友一起分享!快速知晓入门篇核酸纯化技术及基础(主要集中在核酸纯化:genome, DNA, plasmid, RNA):http://www.dxy.cn/bbs/thread/10489541#10489541RNA提取系列---RNA提取流程、实验举例及注意事项幻灯片:http ...

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        【转帖】RNA干扰技术研究进展及其应用

        RNA干扰介绍 (2006年诺贝尔医学奖)据诺贝尔奖官方网站消息,10月2日当地时间上午11时30分(北京时间17时30分),瑞典皇家科学院诺贝尔奖委员会宣布将2006年度诺贝尔生理学或医学奖授予两名美国科学家安德鲁-费里和克拉格-米洛,以表彰他们发现了RNA干扰现象。费里和米洛将分享奖金。因此,搜集了一点相关资料与大家共同学习。请斑竹酌情加分。RNA干扰技术研究进展及其应用作者单位:云南农业大学动物科学技术学院, ...

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        【共享】芯片实验室及其发展趋势

        芯片实验室及其发展趋势作者:中国科学院大连化学物理研究所 周小棉摘要:介绍芯片实验室的一般特点、应用、发展历史和现状。分别讨论相关技术的发展趋势,并对其应用前景提出展望。关键词:芯片实验室、微流控芯片、微全分析系统科研.中国SciEi.com.一、前言芯片实验室(Lab-on-a-chip)或称微全分析系统(Miniaturized Total Analysis System, µ-TAS)是指把生物和化学等领域中所涉及的样品制备、生物与化 ...

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        【交流】如何查找rs号

        如何查找SNP的rs号??2011-07-19 11:57:58|??分类: 默认分类 |字号?订阅原文地址:如何查找SNP的rs号作者:拥抱马来西亚ncbi里对所有提交的snp进行分类考证之后,都会给出一个rs号,也可称作参考snp,并给出snp的具体信息,包括前后序列,位置信息,分布频率等。如何查找rs号,可参考此贴:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=9611445&sty=1&ticket= ...

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        【公告】相约8月 microRNAs完整解决方案暨生物美学技术培训班——姚开泰院士亲自讲解表观遗传学与肿瘤学前沿

        相约8月 microRNAs完整解决方案暨生物美学技术培训班——姚开泰院士亲自讲解表观遗传学与肿瘤学前沿不容错过的理由:专业的品质,丰富的经验,莱德尔带您步入小分子的殿堂,与您分享microRNAs研究最完整的解决方案群雄逐鹿的战场上一块仅存的处女地,microRNAs研究最后一次不容错过的良机:microRNAs启动子的表观遗传学研究与分子生物学明星技术培训最抽象的分子机制可以绘制出最华丽的插图,投稿Nat ...

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        【经验交流】翻译纠错汇总(内容不全,欢迎补充)

        近日看了几位前辈关于翻译纠错的帖子,内容很分散,特此整理了一下,方便大家查看,内容不全,欢迎各位继续补充~~1.in the extreme elderlyThe researchers said their results show theneed for more aggressive prevention, diagnosis and treatment of osteoporosis inthis age group, referred to as the extreme elderly.in the extre ...

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        引物设计总结

        寡核苷酸的优化设计郑仲承( 中国科学院上海生命科学院生物化学和细胞生物学研究所,上海 200031 )在核酸分子杂交、DNA序列测定和通过PCR放大DNA片段等实验中,都需要使用寡核苷酸作为探针或引物,而对这些反应的质量起最重要影响作用的,就是这些寡核苷酸探针或引物。用优化的寡核苷酸进行实验能够很快得到好的结果,而用不够合适的寡核苷酸时,常常得出似是而非的结果,不仅大大增加了后续实验的工作量,还可能一无所获。怎样优化设计 ...

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        染色体技术(3)

        人类染色体姊妹染色单体差别染色姊妹染色单体区分染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)是70年代中期发展起来的染色体处理技术。Latt(1973)在培养的细胞中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),当用Hoechst33258 荧光染料染色时,发现了姊妹染色单体的色差反映和它们之间互换的现象。1974年KO Renberg和Froeed-Lender改进了这一技术,建立了较简易的Brd ...

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        【共享】RNA 抽提分析及期望注意事项

        组织RNA 抽提失败的两大现象是: RNA 降解和组织内杂质的残留。关于降解问题,首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA 不容易降解。现有的RNA 抽提试剂,都含有快速抑制 Rnase 的成分。在培养细胞中加入裂解液,简单的混匀,即可使所有的细胞与裂解液充分混匀,细胞被彻底裂解。细胞被裂解后,裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的 Rnase,所以RNA 得以保持完整。也就是说,培养细胞由于很容易迅速与裂解液充分接触,所以其RNA 不容易被降解;反过来讲 ...

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        【旧帖整理】PFGE(脉冲电泳)

        最近在做脉冲电泳,很感兴趣,本版战友wasteam曾于04年做过电泳方面的整理,其中提到过脉冲电泳,但当时有关帖子较少。现将后来的贴子重新整理,以便查找。 也希望版主能给予加分。PFGE(脉冲电泳)通常的琼脂糖凝胶电泳利用双链DNA 分子在电场作用下,在凝胶中的迁移率不同而达到分离的目的。当双链DNA分子超过一定的大小以后,DNA双螺旋的半径超过了凝胶的孔径,在琼脂糖中的电泳速度会达到极限,此时凝胶不能按照分子大小来筛 ...

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        【交流】关于质粒提取注意的地方

        这是我第3天小提质粒了,每次最后看到的都是可怜的沉淀,心里也特别难受,可是难受也没有办法,需要的是冷静的分析原因,于是打算进行质粒大提了,还要把所有的试剂都重新配制,包括LB培养基。可在此之前,我想请教一下,碱变性法提取质粒各位都有什么地方是特别注意的。为我的最后大提请愿,希望顺利。1、我自己觉得首先是心态问题,说实话,这个实验我已经做了无数次了,这次是最失败的一次,3天连提都失败,本来国庆想休息一下的,现在彻底无望 ...

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        【共享】RNA silencing

        RNA沉默机制研究进展RNA沉默机制的研究主要集中在遗传和生化方面。遗传方面,各研究小组选择遗传突变子的筛选策略,即筛选RNA干涉功能丧失的突变基因。目前在拟南芥中已发现了SGS1、SGS2、SGS3以及SDE1、SDE2、SDE3和SDE4等多个参与RNA干涉作用的基因,(Elmayan,1998;Dalmay,2000)而在链孢霉中发现产生基因消除所必需的基因QDE1、QDE2和QDE3(Tijsterman ...

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        【旧贴整理】关于酵母相关问题

        酵母相关网络资源 推荐一个关于酿酒酵母基因的网站protocols-online 送《Two Hybrid System-Methods and Protocols》 毕赤酵母操作手册 酵母双杂交系统flash动画 酵母双杂交实验常见疑难解答(转帖) 假丝酵母的基因组有没有完成测序?酵母培养 酵母基本氮源(YNB)到底哪里有卖啊??? 酵母中的振荡现象 酵母培养用YNB如何消毒? 酵母培养时,如何抑制细菌生长? 求HB101大肠杆菌菌株酵母DNA提取 酵母的基因组怎么抽提? 请教 ...

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        [共享]DNA测序技术

        利用DHPLC 基因扫描技术进行深入彻底的突变与SNP 筛查Stan L Lilleberg变性高效液相色谱(DHPLC)是一种新型遗传变异筛查技术,可用于单碱基替换(或单核苷酸多态性),小片段缺失或插入等多种基因突变的检测。DHPLC 基因扫描技术可在生殖细胞系和体细胞系中筛查遗传变异。而像特定位点DNA甲基化状态的改变等遗传现象也可用在DHPLC基础上建立的方法来检测。遗传变异的生物学效应是由突变基因的位置和特点决定的,而 ...

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