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外周血培养基配制一、配制用水培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。二、培养基培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2～7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐 ...

该贴内容较多，我花5天才整理成这个样子，但仅我一人之力，虽劳苦却难以求全，遗漏之处难以避免，请大家补充分子杂交分子杂交(综述)1、Southern杂交1-1、southern-blot protocolSOUTHERN BLOT PROTOCOL（English version）SOUTHERN BLOTTING操作手册DIG Application Manual非放射性的southern 杂交方法Southern转膜的方法Southern/ ...

我也是从网上收集过来的，仅供相关人员参考！DIG标记的Northern杂交试验指导一、 RNA提取方法一、改良异硫氰酸胍提取法试剂及其配制异硫氰酸胍变性液：贮存液－在含484ml 水（经DEPC处理）, 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍，加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。贮存液室温保存备用（不超过3个月）。工作液－在每50ml贮存液中加入0.3 ...

复旦大学某教授写的有关质粒的好文，贴在这里与大家共享：从质粒抽提谈起碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可以我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域的研 ...

RNA 抽提之应知应会背景介绍实验前方法/试剂的选择问题解答 (外源性污染导致的问题不在本解答考虑中)RNA 抽提的“三大纪律八项注意”Rnase 污染的10大来源RNase 和 DEPC 处理RNA 抽提的10大窍门提高 RNA 得率经典抽提小技巧特殊组织的抽提样品冻融的影响RNA 质量的判断RNAguard：使降解成为历史的试剂　背景介绍　对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的 RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA ...

美国国家生物技术信息中心(National Center of Biotechology Information ,NCBI) 充分利用Internet ,为用户提供了丰富的生物信息资源。NCBI 的BLAST 程序是进行核酸序列和蛋白质序列相似性比较的优秀工具。1 　BLAST简介NCBIBLAST(Basic Local Alignment Search Tool ,局部对比基本检索工具) 是将核酸序列或蛋白质序列与可用的序列数据库进行相似性比较的一系列程序。其核 ...

晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了 ...

我们将如何应对海量的基因信息新一代测序技术带给人们大量遗传信息的同时，却成为限制其广泛应用的一个障碍。1980年，英国生物化学家Frederick Sanger与美国生物化学家Walter Gilbert建立了DNA测序技术并获得诺贝尔化学奖，至今已有近三十年了。在这三十年，DNA测序技术取得了令人瞩目的进展。目前已进入市场的循环阵列测序平台采用的是与Sanger生物化学测序方法完全不同的原理。在过去几年，应用极 ...

第五节　PCR各处应用模式　　一、兼并引物（Degenerate Primer）PCR　　密码子具有兼并性，如表22-4，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对兼并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变，但核苷酸的数量应相同。兼并度越低，产物特异性越强，设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸，并避免引物3’末端兼并，针对兼并的混合引物已成功地用于未知靶DNA的扩增、克隆和序 ...

1998年Andrew Fire等首次发现并命名了RNA干扰(RNA interference，RNAi)。RNA干扰是指在真核细胞中引入双链RNA(double-stranded RNA)分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异性基因沉默(gene silencing)的现象。属于转录后水平的基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)。该技术的出现为功能基因组学、基因治疗学、药物开发等 ...

1双元载体的农杆菌转化1.1农杆菌感受态细胞的制备1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养。1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。1.1.4. 转入无菌离心管，5000rpm离心5min,去上清液。1.1.5. 加入10ml预冷的0.1M的CaCl2 ...

核酸序列的一般分析流程1.1 核酸序列的检索http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/entrez/query.fcgi?db=Nucleotide1.2 核酸序列的同源性分析1.2.1 基于NCBI/Blast软件的核酸序列同源性分析http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blast.cgi1.2.2 核酸序列的两两比较http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html1 ...

本版有较多关于promoter的讨论，其中不乏精彩好贴，本人也受益较多，现试着总结归纳了如下，希望对大家有用：　　启动子是DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。在基因表达的调控中，转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程。启动子一般可分为两类:　　(1)一类是RNA聚合酶可以直接识别的启动子。这类启动子应当总是能被转录。但实际上也不都如此，外来蛋白质可对其有影响， ...

PCR技术在分子生物学领域的重要性自不必多说，各种新的PCR技术也不断涌现。引物的设计是进行各种PCR的重要前提条件。虽然现在有很多软件可以设计并评价引物，但在实际的PCR扩增过程中，必须对反应体系和反应条件进行优化，尤其是引物浓度，Mg2＋浓度，退火温度等。有时候无论我们如何优化，也拿不到目的产物，只能重新设计。鉴于在引物的设计和合成过程中所花费的时间、精力和财力（尤其对于新手而言），本着资源共享的原则，建立丁香 ...

New England Biolabs（NEB 公司）隆重推出蛋白质标记 SNAP-tag 最新技术，该项技术可以在活细胞及固定细胞中研究蛋白质的功能和定位。SNAP-tag 技术能将哺乳动物细胞体内蛋白质成像并且体外捕获蛋白质，为研究蛋白质提供了强有力的工具。其工作原理是：构建基因，表达融合蛋白质，再与多种荧光基团、生物素或磁珠形成共价结合。为了使用方便，NEB 提供两套系统：一套是标记物可以直接自我标记构建好的融合蛋白质（SNAP-tag 和 ...

微卫星DNA的研究进展1 微卫星DNA的概况1.1 微卫星DNA的构成和分布频率 微卫星DNA (microsatellite MS )，又称短串联重复序列(short tandem repeat STR)，是一类广泛存在于原核、真核生物基因组的DNA串联重复序列。STR核心序列(重复单位)2~6bp，多位于编码区附近，也可位于内含子、启动子、Alu序列中，其重复单位相同，以(CA)n、(GT)n、(CAG)n较常见，重复次数(n)多为15~60次，总长度一般 ...

分子生物学技术讨论区精华索引说明：分子生物学技术讨论区本由Yong主任提议开辟便于大家讨论分子生物学方面问题，但大量所要书籍的跟贴严重妨碍了对技术问题的讨论，导致该贴被锁定。然其中有不少精华帖子亦被淹没，偶心中不忍，奋战几日，将一些对大家可能有所帮助和启发的帖子集中于此，制成索引，有归纳不当之处，还请Yong主任及其他站友指出！基因表达与克隆方面：http://www.dxy.cn/bbs/thread/40236h ...

【CRISPR/Cas9系统的发现历史和应用-@华夏凯奇】-兼谈八卦。水平有限，不准确和班门弄斧之处，还望大家斧正。copyright@华夏凯奇一、CRISPR系统的发现-从细菌的获得性免疫说起CRISPR系统实际是细菌的一种获得性免疫系统。细菌被phage侵染之后，可以获得phage的DNA片段整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，从对phage形成免疫。1） 早在1987年，日本人在大肠杆菌中发现有串联间隔重复序列 ...

实时定量PCR完全手册方法简介所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线。RT-qPCR是由三个步骤组成:1. 反转录:依赖反转 ...

EB（溴化乙锭）到底有多毒？随着每年各类化学物质进入市场，产生残留物的数量不断增加，健康和环境成为日益关注的问题。虽然许多实验中使用的化合物是有毒的，很多都是潜在的危险，但一些化学品没有适当的危险性分类，在日常实验中被广大科研工作者所忽略。什么是EB溴化乙锭？在研究数以千计的实验室残留性有毒物质，最值得一提的就是溴化乙锭（EB；3, 8-二氨基-5-乙基-6-phenylphenanthridinium甲基溴），该物质的潜 ...