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在美国，有一个叫“冷泉港”的地方，那里被誉为生命科学的圣地，是分子生物学者们神往之处。1982年，一部叫《分子克隆实验指南》的书在冷泉港实验室出版社诞生，它的前身是1980年冷泉港真核基因分子克隆讲习班实验方案的汇编。7年后，该书又出了第二版。当时的人们也许未曾料到，这部著作在20年的时间里竟成为指导生命科学前沿科研工作的一部“圣经”。　　然而，生命科学的发展突飞猛进，研究技术也是日新月异，昔日的经典似乎已经不能再继续满足 ...

自己的实验刚刚开始，又涉及到质粒的提取。翻译了OMEGA 的大/小规模质粒提取试剂盒的说明书（D6922-01和D6942-01）。希望能给和我一样的新手一点帮助，同时请大家指正多给建议，特别是自己的心得啊。全是自己打的，帮顶让大家都能下啊:)E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液 ...

REAL-TIME 引物设计与是否跨内含子的检测方法1.园子里最详细的检测引物是否跨内含子的流程2.提供多图显示如何找到基因外显子与内含子3.如何最简便设计跨内含子的引物（利用primer-blast）感谢隔壁的山西人提出这个问题，以及丁香园，google，百度，PUBMED提供解决问题的方法和线索供我拼凑整理。问题一：如何在pubmed上找到目标基因的DNA序列以及其内含子和外显子情况。步骤：打开NCBI主页面，选 ...

“表观遗传学现在成为了肿瘤研究中的热点问题。我们现在已经很清楚肿瘤的形成都伴随着DNA甲基化和组蛋白的修饰异常。全基因组的低甲基化（hypomethylation），抑癌基因启动子CpG岛高度甲基化(hypermethylation)，众多关键基因的组蛋白密码被改变，以及组蛋白H4去已酰化和三甲基化，这些都是肿瘤细胞异常表观遗传谱的明显特征。、、、，我们有必要建立一个雄心勃勃的计划去认识肿瘤发生中DNA 甲基化和组 ...

双酶切连接反应之全攻略前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会，结合丁香园战友的宝贵经验，谈一下质粒重组的一些个人经验。1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUF ...

动物体内转染，简单地说，就是用RNA和DNA直接打动物完成干扰和表达。再通俗地说，用合成的(RNA)或者提取的核酸(DNA)，就可以完成以前的动物转基因或者基因敲除的实验，无需再用病毒或者基因敲除动物。实验周期可以缩短为几天，花费几千元即可进行实验。动物体内转染技术的出现，让广大生物医学研究者，轻松进行动物的基因干扰、导入等操作。尤其是临床医学工作者，可以在很少工作量较少经费的情况下，直接针对研究的疾病进行动物实验， ...

酶切基础知识酶切DNA酶切一般分为质粒直接酶切和PCR产物酶切。DNA酶切及凝胶电泳一.DNA的限制性内切酶酶切分析　　限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从 ...

进了新实验室后一直用Gateway做克隆，发现论坛上很少有讨论gateway的帖子，特开此贴，也欢迎对gateway有经验，有兴趣和有疑问的同行们一起交流经验Gateway官方简介：Gateway®克隆技术的基础是lambda噬菌体的位点特异性重组反应，一种准确保存遗传信息的有效的自然的生化途径。与传统的需要DNA限制性内切酶、DNA连接酶、凝胶电泳和Dundefined*段纯化等多个步骤的单调乏味的亚克隆方法相比 ...

Methods in Enzymology ,Volume 427Elsevier Science,2007; 304стрISBN: 0123739179MicroRNAs (miRNA) are tiny bits of genetic material that were unknown nearly 10 years ago but now represent an exciting field of study in biology. Upon their discovery, researchers revealed for the first t ...

又淘到一本好书，不知道是否有人发过miRNA Protocols,清晰电子版，2006 humana press,分子生物学实验方法系列中的一本，顾名思义是专讲miRNA的，做miRNA的各位可以不用拿siRNA的方法去套了，两者毕竟还是有区别的。目录如下：1. The MicroRNA: Overview of the RNA Gene That ModulatesGene FunctionsShao-Yao Ying, Donald C. Chang, Joseph D. Miller, ...

In vitro site-specific mutagenesisAn in vitro technique in which an alteration is made at a specific site in a DNA molecule, which is then reintroduced into a cell.Various techniques are used; for the cell biologist,a very powerful approach to determining which parts of a protein or nucleotide s ...

自己做ChIP有一段时间了，将一些经验教训写上来，给自己作个总结，备个份。 重要的地方，可以决定结果的好坏 1、cross-link：甲醛浓度、胶联时间一般都使用1%formaldehyde，但也有人用浓度偏高的，比如：add 10 ml of Fresh PBS and add 270 ul of 37% formaldehyde, swirl gently to mix, and place at room temp 10 min.胶联时间很是关键：The duration of formaldehyde treatment is a ...

各位战友：一下是小妹在Invitrogen公司的siRNA designer设计的shRNA序列，均为小鼠基因，也经过Blast验证，质粒选择的是pGPU6/GFP/neo，酶切位点分别是Bbs 1 和BamH 1，请给位专家给予指导！Rictor（190-208、845-863）：1.5-CACCGCTGGGCCATCTGAATAAC-TTCAAGAGA-GTTATTCAGATGGCCCAGC-TTTTTTG-3 3-CGACCCGGT ...

说明：资料占有数和资料利用率成反比，是我们大多数人的一个坏习惯（包括偶自己）。近期论坛不少帖子都对实验室里的所用水感到困惑。我自己最大的一个体会是层析试验中缓冲液的配制，所用的水对离子交换层析和疏水层析的效果有所影响。为此， 特地摘抄一段大家都知道（但未仔细学习）的内容，以共同来温习实验室用水的相关常识。问题：实验室中常见规格的水及使用注意点?1、自来水（Tap water）Tap water is usually of uncontroll ...

看文献想到的。希望大家从实际出发，讨论不同方法的优缺点，注意的是这里的突变是广义的包括染色体的改变。建议讨论从如下方面展开：1、技术名字、基本原理2、具体实现方法/手段3、应用4、优缺点5、相关技术发展概况6、在PNAS、science、nature、JBC等杂志上的经典应用文献翻译与点评7、其他本版前期的明星技术：1. 【交流】核酸版2005年9月份明星技术: ribosome display2. 【交流】核酸版2005年8月份明星 ...

【1】pSUPER vectorhttp://www.oligoengine.com/pSUPER_New/pSUPER_Main2.html【2】pSilencerhttp://www.ambion.com/catalog/ProdGrps.html?fkApp=25&fkSubApp=145【3】psiRNA VECTORhttp://www.invivogen.com/siRNA/psiRNA.htm【4】pGE-1http://www.s ...

http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1713522&sty=3&keywords=pHluorin很久前，2004年的一个关于GFP的贴子。经过很多年的发展，荧光蛋白的发展超出想像。大致总结如下：1，普通的绿色荧光蛋白（GFP）；2，增强型的绿色荧光蛋白（EGFP）；Schmitt, M., et al., 2006. Use of PMA1 as a housekeeping biomarker for assessment of toxi ...

最近做DNA shuffling，本来去年做过，但这次做不知怎么搞的，片段用DNase I怎么也切不好，跑胶后什么也没有，请问哪位做过，交流一下protocol,我的片段1.2kb,想得到100bp的,谢谢建议讨论从如下方面展开：1、技术名字、基本原理2、具体实现方法/手段3、应用4、优缺点5、相关技术发展概况6、在PNAS、science、nature、JBC等杂志上的经典应用文献翻译与点评7、其他本版前期的明星技术：1. 【交流】 ...

无意中看到,觉得不错,拿来与大家分享,内容包括:Useful resources:Blocking with immunizing peptide protocol (BL)Buffers and stock solutionsFluorophore tableTroubleshooting tipsImmunohistochemistry (IHC) / Immunocytochemistry (ICC) protocols:IHC-Fr staining protocolI ...

本期明星技术：allele-specific expression analysis/assay人类基因组计划的结构基因组测序完成后，留下了海量的序列信息。然而，这些序列有何功能，多数尚不得而知。在序列功能研究中，除了基因及其亚结构功能探讨外，还有一个重要的内容，那就是同一序列的多型性也可能具有不同的功能（或具有不同的功能强度）。特别是近来的研究已经肯定性地证明，很多位点同一位置因碱基不同而所致的多态或突变（如SNPs）， ...