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酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。　　戊二醛二步法　　1.　原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。　　2.　标记步骤：　　(1)　称取HRP25mg溶于1.25％戊二醛溶液中，于室温静置过夜。　　(2)　反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml／1分 ...

浅谈分子伴侣与蛋白质折叠作者:贾小宇 本文对蛋白质折叠这一古老的领域的最新发展，尤其是分子伴侣的机理作了一番探讨，对一些新观点和新的实验事实作了介绍，并对一些实验实事作了一些思考，并提出了一些自己的看法。同时预测了结构生物学及技术手段的发展趋势。 生物大分子 分子伴侣 蛋白质的折叠 识别 结合生物大分子的结构与功能的研究是了解分子水平的先象的基础。没有对生物大分子的结构与功能的认识，就没有分子生物学。正如没有DNA双螺旋结构的发现 ...

曾几何时，人们还沉浸在生物技术，特别是基因操作技术带来的喜悦之中。通过向细胞转移基因，尤其是让基因进入生物体或从生物体剔除基因的确改变了细胞和生物的表型。于是，人们试图利用这些技术制备生物产品，甚至治疗人类各种疾病。但是，自从1990年第一例人类基因治疗临床试验取得成功以来，这个领域总的进展是令人沮丧的。主要的问题还是技术方面的。人们很难将转基因引入细胞和机体，更难以将它们定向地导入特定类型的细胞。即使弄了进去 ...

狭义来讲，提取指制备物与细胞固体成分或其它结合成分的分离，由固相转入液相或从细胞内生理状态转入外界特定溶液环境的过程，即分离前期被提取物从破碎的细胞中释放出来的过程。如果被提取物程固相或与固体结合，提取时由固相转入液相，常称为固液萃取；如果被提取物已经呈液相存在，提取时由一液相转入转入另一互不相溶的液相，这种方法称为液液萃取。　　广义来讲，提取又可称为抽提或萃取，贯穿在整个分离纯化过程中，如核酸制备中用氯仿或苯酚反 ...

目 录概述... 1手册的概述... 1双向(2-D)电泳概述... 1手册中使用的标记符号... 2第一向等电聚焦（IEF）的仪器选择... 3第二向SDS-PAGE电泳设备的选择... 4仪器的选择... 6等电聚焦系统的选择... 6第二向电泳的设备选择... 8MultiphorII平板型设备... 8垂直系统... 9实验室技术... 9第一章... 11样品制备... 111.0 样品制备——一般策略... 111.1 细胞破碎的方法... 131.1.1 温和的裂解方法... 131.1.2 剧烈的裂解方法... 151.2 防止蛋白质水解... 16 ...

与传统方式相似，重组蛋白的分离纯化也是利用其物理和化学性质的差异，即以分子的大小，形状，溶解度，等电点，亲疏水性以及与其它分子的亲和性等性质建立起来的。与此相对应的分离纯化方法参见表1。从表1可看出，当前蛋白质的纯化主要是依靠层析和电泳技术。由于重组蛋白在组织和细胞中仍以复杂混合物的形式存在，因此到目前为止还没有一个单独或一整套现成的方法把任何一种蛋白质从复杂的混合物中分离出来，而只能依据目标蛋白的物理化学性 ...

【蛋白质技术讨论版资源共享之一】5分共享 常用蛋白技术电子图书 【蛋白质技术讨论版资源共享之二】1分共享 常用蛋白技术电子图书 致各位战友的几点要求：1.请勿修改登陆密码。2.请勿对外传播本邮箱地址，以及登陆密码。3.请勿更改、删除其中的内容。4.有任何问题，请到丁香园蛋白技术讨论版相应板块讨论。5.为了避免由于访问量和下载量的原因导致信箱被锁的情况发生，请各位站友控制自己单位时间内的下载量。谢谢合作！以上几点请大家多多配合，共同 ...

一、样品的浓缩　　生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀，为了保存和鉴定的目的，往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的：减压加温蒸发浓缩通过降低液面压力使液体沸点降低，减压的真空度愈高，液体沸点降得愈低，蒸发愈快，此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。空气流动蒸发浓缩 空气的流动可使液体加速蒸发,铺成薄层的溶液，表面不断通过空气流；或将生物大分子溶液装入透析袋内置于冷室，用电扇对准吹风，使透过膜外的溶剂不沁蒸发，而 ...

整理蛋白版06年2月无人应助贴如下:蛋白质连接的问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5458496&sty=1&tpg=19&age=0dystrophin和dystrophin genehttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5458022&sty=1&tpg=19&age=0等电聚焦的临床应用（主要在检验医学中的）http://www.dxy.c ...

大家好，我有2D分析软件PDquest8.0版 找了好多个网络硬盘，都没找到个免费的够大的空间让我上传，文件35M，下面是软件介绍，不知道大家能不能提供空间让我上传，好东西大家分享嘛！另外我还把2D实验手册上传到miss709@56.com密码123456，请大家去下吧。探索者系列之PDQuest“The Discovery Series”特点“The Discovery Series”系列软件具有如下共同的特点：PDQuest是B ...

整理蛋白版2006年04月无人应助帖如下， 请广大战友积极应助，加分从优！！！蛋白质组学讨论区【求助】大哥哥姐姐，该网站的关于PMF\PST等介绍，放在哪啊？我在该网站看到这些技术的详细介绍，但当时忘保存，我找了精华贴总汇，没找到，能告诉我在哪放着http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5874150&sty=1&tpg=5&age=0【求助】请问如何解释鉴定出的蛋白质分子量/等电点大多数都有 ...

蛋白质提取与纯化技术选择材料及预处理　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场 ...

随着ICAT的技术日趋成熟，它作为一种较新的定量蛋白组学工具越来越吸引着大家的眼球，勿庸置疑它是定量蛋白质组学的方向之一。版面上之前也有过很多的相关讨论，可以说是非常不错，没有看过的朋友可以参考：1. 由biodna超版发起的ICAT精华贴:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=408757&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=02. codegreen主任进一步的一些思考和见解: ...

2009年度诺贝尔生理学或医学奖在瑞典卡罗林斯卡医学院揭晓，三位美国科学家伊丽莎白·布兰克波恩(ElizabethH.Blackburn)、卡罗尔·格雷德(Carol W. Greider)以及杰克·绍斯塔克(JackW.Szostak)共同获得该奖项。他们发现了由染色体根冠制造的端粒酶(telomerase)，这种染色体的自然脱落物将引发衰老和癌症。　　伊丽莎白·布兰克波恩来自美国加利福尼亚旧金山大学，于1948年出生于澳大利亚。 ...

还是重磅出击！——Cell杂志评出的10篇文章！全部全彩pdf！《细胞》08年11月最受关注的十篇论文《细胞》创刊于1976年，现已成为世界自然科学研究领域最著名的期刊之一，并陆续发行了十几种姊妹刊，在各自专业领域里均占据着举足轻重的地位。《细胞》以发表具有重要意义的原创性科研报告为主，许多生命科学领域最重要的发现都发表在《细胞》上。11月《细胞》前十名下载论文为：1. An Oncogenomics-Based In Vivo RNAi Sc ...

我是一个门外汉，刚刚做WB。做出来后全是模糊的片子，还有就是只有黑点，没有条带。一直没找到原因。恳请各位高人教导。并且按照以下的方法做。我做的是SD大鼠骨骼肌组织的蛋白检测，取300mg肌肉，最终加2.4ML裂解液。10000转离心10分钟。定蛋白也是按一下方法。上样按每10微升80微克蛋白上的样。用的是大连竞迈公司的垂直电泳仪。装模是半干法，按没分钟1KD转的。一抗1：1000.二抗1：6000。。 我测的蛋白在95KD ...

免疫检测法 抗体制备技术　 抗体（antibody，Ab）是机体免疫系统受到抗原刺激后产生的特异性球蛋白，称免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)。根据其重链稳定区的分子结构和抗原性的不同，可将为类Ig分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等五大类。由遗传基因决定所产生的抗体，称天然抗体（natural antibody），由抗原激发免疫细胞产生的抗体，称免疫抗体（immune antibody）或称特异地性抗体。人工制 ...

一直感觉园子里针对Western Blot实验的帖子很多，最近浏览了一下蛋白实验的论坛，看到还是有很多同学遇到各种各样的问题，我就把我们实验室比较成熟的Western Blot实验步骤整理了一下，也挂出来供大家参考一下，希望对您的实验有帮助。实验步骤：1.分别配制 5%浓缩胶和12%分离胶 12%分离胶10mL 5%积层胶6mLH2O 3.3mL H2O 4.20mL30% Acrylamide 4mL 30% Acrylamide 1mLpH8.8 Tris HCl（1. ...

凝胶层析凝胶层析又称为分子筛层析或凝胶过滤。具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用最广，商品名是sephadex型号很多，从G10到G200，它的主要应用范围是：①分级分离各种抗原与抗体；②去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片；③分析血清中的免疫复合物；④分子量的测定。（一）原理凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质， ...

1.Principles of Genetics ,Tamarin,7th_Edition.我从网上找来的，绝对可以下载，非常感谢上传者，也感谢首发者。下载时不可以用任何下载工具，不然下载不了的。http://rapidshare.com/files/5709290/Principles_of_Genetics__Tamarin__7th_Edition.pdf2.Working with Molecular Genetics(with soluti ...