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蛋白的复性是一个世界性的难题，没有通用的方法，甚至没有靠得住的规律，只能试。可以参考以下文章。该文出处已经忘了，如果有人知道原创作者或网上出处，请补充。包涵体表达的蛋白的复性包涵体表达的蛋白的复性包涵体：包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集，形成无活性的固体颗粒。包涵体的组成与特性：一般含有50%以上的重组蛋白，其余为核糖体元件、RNA聚合酶、外膜蛋白ompC、ompF和ompA等，环状或缺口的质粒DNA，以及脂体、 ...

后基因组时代，蛋白质研究又掀起新一轮的高潮，掌握基础的蛋白质技术，是蛋白质研究这个行当中所有人都应该做的。蛋白质技术包括太多，我在这里只想与战友们一起讨论关于蛋白质定点突变的技术。结合自己的实验研究，我翻译了一些手头的资料，拿到这里跟大家讨论，园子里高人甚多，希望我这块砖能引出更多的玉来。参考文献：PCR Approaches to DNA Mutagenesis and Recombination---An OverviewBinzha ...

我最近两个月一直在做ECL western，非常困难，都快做疯了，有几条个人经验供参考，对改善困难的非特异带和背景应该会有帮助：1. 不要用平底小盒或杂交袋，用可以旋转的杂交管（可以用50ml塑料离心管做成），我刚刚得到了比较结果，效果大不一样。2. 膜在blocking前先用stripping buffer处理一下（当然也在杂交管中进行，注意要通过旋转使处理均匀）。我偶然发现经过该处理后背景异常干净。并且经多次重复后得出此经验。 ...

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上， ...

读硕士时曾经想发表的关于蛋白印迹法（Western blot）的使用体会，但因为缺少较多样本对比分析，所以没有投得出。但我觉得实验中经过一些挫折后得到些体会，应该与大家分享一下。否则有点可惜了。也希望由此获得加分机会。蛋白印迹法的使用体会蛋白印迹法（Western blot）是分子生物学实验中研究蛋白质的一种重要方法。可用来半定量测定标本中的目的蛋白。由于标本中目的蛋白含量有限，为提高检出率，最后一步可以用化学发光法替 ...

整理了一下十月份无人应助贴，以支持版主的工作已被锁、被扣分、标题为空以及不符合发贴格式的无人应助贴不在此列应助战友请到积分申诉区给出链接，谢谢【求助】我想求教一个关于WESTERN的问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4772826&sty=1&tpg=7&age=0【求助】 请问有做pgap表达系统的么http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id= ...

下面这个网站，大家可以看看。http://www.stcsm.gov.cn/learning/lesson/shengwu/20030211/lesson-1.asp第一课　概论　　一、蛋 白 质 组 学（Proteomics）　　90年代初期开始实施的人类基因组计划，在经过各国科学家近10年的努力下，已经取得了巨大的成就。不仅完成了十余种模式生物（从大肠杆菌、酿酒酵母到线虫）基因组全序列的测定工作，还有望在2003年提前完成人类所有基因的全序列测定。那 ...

觉得这篇文章不错啊，贴出来与大家分享！恳请版主加分！真核表达系统的研究进展经络 陈勇自上世纪70年代基因工程技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今日已取得令人瞩目的成就。在各种表达系统中，最早被采用进行研究的是原核表达系统，这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体 (一般为质粒)转化细 ...

选择性阻止大脑中称之为11beta-HSD1的酶在实验中成功逆转了年老小鼠的记忆丧失， 在全球人口老龄化的背景下，这一研究成果将有深远的影响意义。—— Docofsoul Promising Drug Candidate Reverses Age-Related Memory Loss in MiceScienceDaily (Oct. 13, 2010) — Researchers at the University of Edinburgh report a new experimental compou ...

在这个领域做了一段时间的工作了，下面根据个人经验，介绍几个“蛋白质表达”纯化相关的SCI/SCIE杂志，希望对新手能有所帮助。其实收载蛋白表达纯化的杂志有很多，只是看杂志主页的介绍，似乎多数biotech相关的杂志都是收载的，但实际上并非如此，很多杂志只要新蛋白，或者新技术，或者有别的特殊要求；而版上多数朋友的工作可能是应用相关的，研究没有好坏，杂志不分高低，只是在选择杂志时稍微用心一下，可能为后面的审稿及修稿省去 ...

丁香园蛋白质技术讨论版公用邮箱正式开通＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝蛋白质技术讨论版目前的公共邮箱之供战友下载资料用，因此导致很多战友的大于300Kb的资料无处上传。鉴于此，特开通这个公共邮箱供广大战友上传以及下载资料用。帐号：dxy-protein@56.com空间大小：2G单个邮件附件上限：15M备份邮箱：backup-protein@56.com空间大小：2G单个邮件附件上限：15M1、上传 ...

蛋白纯化经验指南（）摘自中国色谱网1) 白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋问有哪些可能会出现这种原因？怎么解决？测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50～60％左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但这样的条件下切割完后目的蛋白会沉淀，我用0.5％CHAPS助溶可勉强溶解部分，目的 ...

实验一 蛋白质含量测定法本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比 ...

生物传感器是利用附着在传感器界面上的待测生物分子与环境化学物质，或特定分子间专一性的交互作用后产生 感应信号，作为生物分子间交互作用(biomolecular interaction analysis，BIA)的检测装置。随着微机电及光电技术迅速发展，整合了光机电并应用于生物传感器上，已经开发出不同的研究领域，如：共轭焦镭射扫描荧光显微术 (confocal laser scanning fluorescence microscopy，C ...

给大家分享一下做了两次itraq实验和分析后的一些经验，有什么说的不对的，请各路大神指教蛋白质组学中itraq数据一般来说做如下分析的比较多1.差异蛋白筛选 2.层次聚类分析 3.差异蛋白GO分类 4.差异蛋白pathway分析 5.差异蛋白互作网络构建我也只能简单介绍一下这些数据分析1.差异蛋白筛选，一般用到的两个值是foldchange值和p值，其中前者是表达量的倍数值，后者是学氏-T检验值，一般都是运用这个两个值来筛选的 ...

现在大家都是做SDS-PAGE或者双向电泳比较多，而做非变性电泳的似乎少一些。而我本人接触非变形电泳较多，一直认为它还是很有特点的，能够有很多独特应用之处的，所以在此结合我本人经历向大家介绍一下非变性电泳。非变性电泳，蛋白质在电泳过程中是处于非变性的，电泳时蛋白的迁移率取决于蛋白的电荷和分子量，非变性电泳在完成电泳后，可以进行蛋白质活性测定（如果是酶的话，可以进行酶活检测）或者检测同功酶，或含亚基的完整蛋白的分 ...

最近做了taq酶的表达和纯化，将优化的实验流程和一点心得贴上来，希望对大家有帮助，更希望得到批评和指正TaqDNA聚合酶表达载体的构建与提取纯化1 .背景重组TaqDNA聚合酶基因及表达载体插入重组Taq DNA聚合酶基因的pET-28a表达质粒，该质粒是由美国Novagen公司推出的能在大肠杆菌中高效表达的一种质粒载体。该质粒在克隆位点前有1个T7启动子，在T7启动子前有1个6×His-Tag coding序列，是T ...

迎来金秋十月，蛋白版作为实验技术讨论区一个重要的板块，长久以来得到众多热心的战友厚爱和支持。为了答谢战友们的关心和维护，现举办九万帖有奖抓图活动，希望广大战友在这个充满激情的十月变得更加富有活力。在这里感谢大家长久以来的热心和关爱，你们才是蛋白版的支柱和主人加分办法：奖励第90000帖发帖战友和首先抓图并贴图者（以贴图时间最先者为准）：1 、抓到第90000贴抓图的可加分，时间以发贴时间/修改时间为判断标准。发贴时 ...

不记得是07还是08年我发过一个帖子，询问western淬灭的解决办法，至今，仍有站有私信我关于这个问题的解决办法。与其一个一个的回复，还是发个帖子，特别说明，帮助更多的朋友走出这个困扰。从私信我的站友的数量上看，western淬灭的现象还是挺普遍的。解决的办法其实非常简单，也常常有人提及，只是我们对这个改进有时不敢相信，或者没有做到相应的程度。呵呵，不卖关子了，下面就对荧光淬灭的现象形成和解决办法做一个详细的解 ...

针对核酸序列的新蛋白预测就是在核酸序列中寻找基因，找出基因的位置和功能位点的位置，以及标记已知的序列模式等过程。在此过程中，确认一段DNA序列是一个基因需要有多个证据的支持。一般而言，在重复片段频繁出现的区域里，基因编码区和调控区不太可能出现；如果某段DNA片段的假想产物与某个已知的蛋白质或其它基因的产物具有较高序列相似性的话，那么这个DNA片段就非常可能属于外显子片段；在一段DNA序列上出现统计上的规律性 ...