全部

离心原理　当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时，由于重力场的作用使得悬浮的颗粒逐渐下沉。粒子越重，下沉越快，反之密度比液体小的粒子就会上浮。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态和密度有关，并且又与重力场的强度及液体的粘度有关。象红血球大小的颗粒，直径为数微米，就可以在通常重力作用下观察到它们的沉降过程。此外，物质在介质中沉降时还伴随有扩散现象。扩散是无条件的绝对的。扩散与物质的质量成反比，颗粒越小扩散越严重。而沉降 ...

做了五个月的Western Blot ，有一点点小心得，给新手点经验．蛋白提取：１． 总蛋白提取（胞膜，胞浆，胞核）：组织匀浆后,15000g, 4度, 20分钟后,取上清.Buffer:NP40 750ul, 脱氧胆酸钠0.5克, SDS 0.1克, 加undefinedPBS 至100ml. 再加入PMSF(7.4mg/ml) 0.1ml. (现用现加)7.4mg/ml PMSP异丙醇溶液: 取A mg PMSF 加 A/7.4 ml 异丙醇.工厂-20度储存２．组织膜蛋白提取：所在操作冰上进行（1）取组织，用PBS冲洗干净组织上的 ...

【兴趣小组】《Guide to Protein Purification, 2nd Edition》读书笔记（二）http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=16631165&sty=1&tpg=1&age=0下载千本书不如好好读一本书，承蒙FreeCell版主提供的资源，《Guide to Protein Purification, 2nd Edition》Methods in Enzymology, Volume 463http://www. ...

本篇虽然是《蛋白质纯化武器》系列中的第三篇，但它属于全体战友，属于伟大的互联网。系列前两篇分别为：蛋白质纯化武器－设备篇http://protein.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=15120322&sty=1&tpg=1&age=-1蛋白质纯化武器－工艺篇http://protein.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=15298689&sty=1&tpg=1&age=-1与前两篇为本 ...

【转帖】染色质免疫沉淀（ChIP）技术的难点及应用本文转自密理博中国博客，转载请注明出处作者：柴晶晶序言随着人类基因组测序工作的基本完成，功能基因组学的研究逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域。研究某个蛋白因子的调控功能，可以通过对蛋白活性（激活或抑制其活性），蛋白数量（过表达Overexpression或基因缺陷型Knockout）, 以及蛋白功能（功能缺陷型蛋白Dominant- ...

膜分离是在20世纪初出现，20世纪60年代后迅速崛起的一门分离新技术。膜分离技术由于兼有分离、浓缩、纯化和精制的功能，又有高效、节能、环保、分子级过滤及过滤过程简单、易于控制等特征，因此，目前已广泛应用于食品、医药、生物、环保等各个领域。康宁生命科学的过滤、超滤产品在生物医学及制药研究领域有着及其广泛的应用，适合药品及生物制品的澄清、分离、纯化和浓缩等各个环节。本人有多年的膜过滤技术经验，受丁香园和Corning（康宁 ...

首先欢迎您到蛋白质技术版块来，头次为客，下次为主，希望您在本版有收获，也希望您伸出热情的双手帮助处在实验困难中的战友。如果您已阅读了本版的规则，您已经不全是一名新手了。本话题祝贺您进入下一个阶段，如何使用丁香园资源。这只是一个简装本，更详细更具体的指南，您可在丁香园 --- FTP 资源讨论版找到。链接是：http://www.dxy.cn/bbs/post/page?bid=86&sty=1&age=0进入话题前重申：丁香园资源都由热心 ...

很遗憾，dxyprotein@163.com 邮箱已经由于不正当使用遭禁用：http://www.dxy.cn/bbs/thread/3590569http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3705030&sty=3&age=0&tpg=1&ppg=3请需要下面资料的朋友耐心等待，我们将将以下资料上传到老赵FTP，请以后直接从老赵航母下载，具体使用参照老赵航母规则，谢谢理解！邮箱中具有的资料：pi ...

~ ~ ~ ~ ~ 蛋 白 版 一 周 无 人 应 助 帖 ~ ~ ~ ~ ~ 1. 本帖仅每周更新本楼一周无人应助帖和每月更新2楼一月无人应助帖，既往帖请于跟帖中寻找。2. 原则上自发帖之日起超出3天无人应助（本人顶帖亦算作应助）则归入无人应助帖，应助战友请于原帖后发帖应助,应助48h后自认为应该加分而未能加分的战友可到积分申诉区给出应助链接以便加分。3. 非整理员跟帖者一律删除。如有良策或纠错或其他可pm整理者，我们将专辟4楼用于回应。4. 已应助帖不代表求助已经解决，鼓励战友继续积极应助，加分机会与尚 ...

2011年鄙人做western的时候，发现目前的资料都很老，网上的资料也大多互相传抄，说法各异，于是综合了目前网上所能找到的资料和个人实际经验，编辑了这份western blot操作步骤2012版，内容包括主要操作步骤和所需要注意的有用的细节，并附上参考文献（原谅我无法像Endnote那样一一注明文献出处，只能大概标注出引用的参考资料），希望对大家有帮助。鄙人按下文的步骤操作已经做出来了稳定可重复的、背景干净的w ...

下游纯化工艺简介Downstream（下游）与上游相对的概念，一般而言，上游指基因克隆、细胞培养等目的产物表达工序，下游指从表达有目的产物的复杂的混合液中分离纯化得到符合要求的目的产物的一系列步骤。美、日、欧等发达国家生物技术产品工业化的实践证明：生物技术产品的产业化高度依赖于基因工程下游工序技术及设备的进步。一、纯化工艺常用衔接技术：1、盐析。常采用硫酸铵、硫酸钠盐析，获得的盐析沉淀物在低温冰箱(

自我总结的Westen Blot步骤，简单实用！蛋白质的提取（整个过程冰上进行）一．组织膜蛋白裂解液 bufferA+1%蛋白酶抑制剂蛋白保存液 40%SDS+60%RIPA+1%蛋白酶抑制剂1.-80°C冰箱中取出组织放入研磨管中（研磨管和配套的研磨棒事先用去离子水冲洗，用纸吸干水)按600-700μl/100mg组织加裂解液研磨（研磨后研磨管和研磨棒用去离子水冲洗，用纸吸干水）2.用1000枪转入1.5ml离心管中4°C离心，15 ...

工欲善其事，必先利其器。对照一下，你的实验室还缺那些？（1）超声波细胞破碎机适用于5－100g湿菌体超声破碎，实验室规模用。一般可选择直径10、15、20mm的超声探头。推荐国产机器为宁波新芝。（2）高压匀浆机大规模生产用，对菌体量无限制。破菌效果好，但要注意冷却。（3）高分散乳化机均匀悬浮菌体用，比搅拌快，均匀性好，特别适合于大规模生产。另外，大规模生产时缓冲液的配制很有用，可快速溶解、混匀。推荐品牌：IKA 国产品牌：FLUKO ...

由于是新手，且前次在实验间隙整理，时间仓促，有诸多不足，现重新整理如下：SDS-PAGE前两条Marker样品弥撒原因SDS-PAGE电泳中溴酚兰指示带弥散的问题电泳时蛋白条带弥散蛋白质跑不到分离胶中SDS-PAGE怎么跑不出带？蛋白条带丢失的原因电泳快速脱色及染色从sds胶里面回收蛋白的几个相关问题SDS-PAGE电泳后可以回收再复性吗？用什么方法保存二维电泳SDS胶？SDS聚丙烯酰胺凝胶的干燥保存方法等电 ...

喷血推荐blue sliver胶体考染法！我做了2D的三块平行胶，一个一般考染，一个blue sliver，一个银染（如图从左到右），我想不用我多解释什么了吧？！！愿意喷血向大家汇报这种染色方法的初步尝试结果和经验！！一、先讲讲本版对这种染色方法的提出和进一步讨论过程：1、siashq大侠在“请教：2DE考染的困惑”http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1253068&sty=1&tpg=2& ...

不知道有多少人成功用杆状病毒——昆虫细胞表达系统成功进行过蛋白表达？我最近表达一段病毒的非结构蛋白nsp-6，构建的重组Bacmid质粒经PCR鉴定正确，可是进行表达时，却未见蛋白表达，同时进行的试剂盒对照（含CAT基因的重组细胞中则有较好的表达。我听说约有70%的蛋白在原核表达系统中是不表达的，但不知道这样的情况会不会发生在我用的昆虫细胞表达系统，除了实验操作失误方面的原因，还有什么因素是不使蛋白表达的，请大 ...

这是园子里各位战友的经验或者困惑，希望对大家在研究和工作中有一定的帮助。蛋白表达？http://www.dxy.cn/bbs/thread/109985蛋白表达http://www.dxy.cn/bbs/thread/518317原核表达？http://www.dxy.cn/bbs/thread/111135基础表达？http://www.dxy.cn/bbs/thread/218210蛋白表达http://www.dxy.cn/bbs/t ...

分享我整理的56邮箱(生物相关，超过4000兆)这些书籍资料来自阿果等论坛，经本人整理，全部奉献给大家，希望大家能喜欢！！邮箱名：zhangjt1234@56.com使用方法:你先申请一个56信箱(去www.56.com申请)，登录后点击“共享资源”，填入zhangjt1234，即可看见我的电子书包括以下文件：网友共享 健与美 2005.12.17 14:13 11328.10Kb网友共享 origin中文版教程 2005.12.16 13:53 5424. ...

1 蛋白质含量测定法2 WESTERN PROTOCOL3 Western免疫印迹（Western Blot）4 蛋白质沉淀法5 蛋白质提取的方法总汇 1 蛋白质含量测定法本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十 ...

默克密理博2010年快乐“膜”术师评选活动——只要提交一个漂亮的蛋白印迹图(WB)，即有机会赢取iPOD大奖!　　　活动期间，跟帖发表最新westernblot蛋白印迹图即可参赛，赢得实物奖品，如果投票结果进入六甲，就有机会拿到超炫的 iPod shuffle MP3，快快行动吧！参加投票者都有机会赢得高灵敏度WB显色液和精美小礼品一份！（大奖以实物为准）默克密理博2010年快乐“膜”术师评选活动自2010.10.12启动以来，从“作品提交 ...