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第一节 概 述 　　从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之cDNA的合成和克隆已成为当今真核分子生物学的基本手段。自70年代中叶首例cDNA克隆问世以来,已发展了许多种 ...

这个试验如何直接用细菌模板扩PCR？在real time反应中如何选择control 基因？如何知道一个已知序列的基因在保守序列呢 保守序列在引物设计中是否是一个必须明确的问题 保守序列和NCBI中CDS的又有什么区别呢？关于保守序列 如何知道？做RACE时基因特异性引物的设计这样做还能反映目的基因的转录水平高低吗?DNA凝胶直接作为模板DNA变性时间是否与片断长短有关？GenomeWalker Kits可否用来进行未知RNA ...

实时荧光定量PCR——一种科学准确的定量方法实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。本文试就其定量原理、方法及参照问题作一介绍。一. 实时荧光定量PCR原理所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧 ...

http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4280976&sty=1&tpg=44&age=0如何用DGGE-PCR研究微生物分子生态http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4283300&sty=1&tpg=44&age=0求助：如何设计这种引物呀？？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4284441&sty=1&t ...

TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用 ...

实时定量PCR应用中的问题及优化方案聚合酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR）自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。随着分子生物学技术研究的不断进展，定量PCR技术取得了突飞猛进的发展，不仅建立了一系列的方法，而且也诞生了许多与这些方法相匹配的新型热循环仪和实验材料。实时定量PCR(real-time qua ...

PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 。无论定性还是定量分析，分析的都是 PCR 终产物。但是在许多情况下，我们所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量 PCR 技术应运而生。所谓的实时荧光 ...

原有战友发过，但发现链接基本已失效，现重新上传，有需要的战友请下载（本楼的4个附件要叮当，后面的免叮当）。下面是转载的书籍介绍：内容简介miRNA能抑制其他基因的表达，并且参与众多的生物学过程，包括细胞增殖、凋亡、细胞分化和发育。本书介绍了miRNA的基本概念：阐述了关于miRNA预测筛选、分离和测定的多种先进的技术和方法：提供了包括在植物、线虫、果蝇、鱼、鸡、小鼠和人类等一些物种中使用的多样化、新颖和有价值的miRN ...

自己整理的protocol,希望对大家有所帮助！Preparations:1.高压2遍的物品及试剂：Ep管移液枪头0.1%DEPC水—v/v, 室温静置过夜-高压2遍（大Ep管分装 后冻与-20℃）2. 试剂：Trizol（4度）100%无水乙醇（生产日期近，越久的挥发越多；及时盖盖）氯仿（三氯甲烷CH3Cl3）异丙醇3. 其它：手套【需要勤换-防止RNA酶降解RNA】；口罩；冰盒；刮匙。半小时前启动4度离心机。基本是室温操作。Protocol：1. ...

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用多聚集链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具，本文就此技术及其应用做一综述。1 实时荧光定 ...

请问哪里可以购rat heme oxygenase-1（rHO-1）的全长cDNA？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5598968&sty=1&tpg=7&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5570022&sty=1&tpg=12&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5542551&sty=1 ...

8月1－10号无人应助贴汇总，请高手出手应助，恳请斑竹从优加分。同时请发贴不规范的战友按照版规修改帖子。求助！ rabbit beta-acitn primer300bp左右http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4003101&sty=1&tpg=34&age=0请大侠帮我看看我的引物！http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4003655&sty=1&tpg= ...

确诊丙肝　　目前全世界有近2亿丙肝病毒感染者，我国受感染者就达6000万。由于至今缺乏有效的预防和治疗方法，早期诊断是防止丙型肝炎病毒传播的有效手段。1993年，我国研制成了第一代丙肝检测试剂，但经过多年临床应用，时有漏检现象发生，2003年，科研人员利用新的思路和技术攻克了困扰医疗界多年的问题，研制成了我国自主知识产权的丙肝确认试剂，使广大受血者免受丙肝病毒感染。　　1988年春，一场空前的甲肝大流行突然袭击了中国上海， ...

PCR 引物设计及软件使用技巧！自从1985 年Karny Mullis 发明了聚合酶链式反应以来，PCR 技术已成为分子生物学研究中使用最多、最广泛的手段之一，而引物设计是PCR 技术中至关重要的一环。使用不合适的PCR 引物容易导致实验失败：表现为扩增出目的带之外的多条带（如形成引物二聚体带），不出带或出带很弱，等等。现在PCR 引物设计大都通过计算机软件进行。可以直接提交模板序列到特定网页，得到设计好的引物，也可以在本地计算机上运行引物 ...

光度计测量的转换:双链DNA (ds DNA)：A260 = OD260 = 1 相当于50 µg/ml溶液单链DNA(ss DNA)：A260 = OD260 = 1相当于33 µg/ml溶液RNA：A260 = OD260 = 1相当于40 µg/ml溶液参考文献：Freifelder, D., Physical Biochemistry: Applications to Biochemistry & Molecular Biology, W.H. Freeman and Company, CA, 1982, p. 494-536.核酸分子量计算方程式：吸光度 ...

最近一直专注于简并引物的设计。从园子里和其他地方学习了不少，终于也设计出了满意的简并引物。现将全过程一并贴出，以供大家学习交流用。所用软件：DNAMAN， FastPCR，在线Blockmaker (http://bioinformatics.weizmann.ac.il/blocks/blockmkr/www/make_blocks.html)，在线Codehop (http://bioinformatics.weizmann.ac. ...

做了快一年的SYBR G的定量实验了,有一些心得,写出来大家交流下.也是今天在学校的BBS上有人推荐这里的,觉得很不错.我们用的机器是ABI 7900,我自己比较喜欢的试剂是ABgene的QPCR sybr ROX MIX.undefined试剂我一般再进行稀释一倍后使用,反应总体系是10ul.用SYBR G来做的话,引物非常重要.我设计引物使用Primer 5,一般选择上游引物跨最后和最后第二个外显子,下游引物在最后一个外显子中,实在找不到,可以前移, ...

Oligo使用方法介绍转载请注明来自丁香园发布日期: 2006-12-13 19:57 文章来源: 丁香园关键词: Oligo 引物设计 PCR 软件作为目前最好、最专业的引物设计软件，Oligo的功能很强，在这里我们介绍它的一些主要功能，如：普通引物对的搜索、测序引物的设计、杂交探针的设计以及评估引物对质量等等。在正式进行引物设计前，我们首先面临的一个任务就是向Oligo程序导入模板序列，根据不同的实验情况，导入模板有三种方法：1、直接用键盘输入 ...

PCR常见问题总汇PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底 ...

常规PCR一般注意点：1）PCR模板是关键，引物可以优化。制备模板的时候，一定要注意核酸模板的纯度和量。纯度上要避免杂质和杂蛋白质的混入，同时还要注意添加模板的量，模板很理想的话，不用加太多，加的多了，混进去的杂质机会就多了。当模板的浓度过低,比如低于100个分子时, 引物和模板之间就很难发生反应. 引物容易自身进行反应形成二聚体.用 booster PCR,即开始几个cycles保持primer的低浓度,保证primer:tem ...