定 量 PCR 技 术 简 介聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）是微量核酸扩增的有效工具，由于其灵敏、特异、快速等优点，在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技术的发展，特别是病毒或肿瘤的治疗监测、疾病的诊断、机体基因表达调控方面，不仅需要检测其存在是否；而且还需要得知扩增前标本中的模板的数量，因而必须对PCR进行定量检测，即定量PCR技术，本文将对定量PCR的定量原理、技术 ...
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染. (二)PCR试剂的污染:主要是由 ...
厦门大学第四届荧光PCR─基础与应用研习班（2010年11月14日-11月20日，厦门大学分子诊断教育部工程研究中心）实时荧光PCR以特异性强、灵敏度高、定量准确、全封闭等优点，已成为基础生物学研究的重要平台技术，正成为临床诊断新一代标准技术，广泛应用于传染病、遗传病、肿瘤等领域。为使广大一线工作人员全面掌握该技术，同时熟悉该领域的最新进展，厦门大学分子诊断教育部工程研究中心在2004、2006、2008年成功举办 ...
“实时荧光定量PCR仪原理及仪器操作实训班”第一论通知实时荧光定量PCR技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已广泛应用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。为了充分提高荧光定量PCR仪的使用效率，提高广大使用者的试验成功率，我们将于10月23-24日举办《荧光定量PCR仪原理及仪器操作》实训班。培 ...
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时 ...
标 题: PCR实用技巧从同学那里copy的，与大家共享：增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是G ...
结合网上查阅的一些信息和TaKaRa使用说明书中的引物设计要求，同时结合文献上的论述，总结出Real-time PCR 引物设计的要求及设计步骤。首先向那些以前发布信息的朋友表示感谢！因为有些是引用你们的（由于引用的比较散，无法署名感谢）1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区5’端的300-400bp区域内，可以用DNAman, Alignment 软件看看结果。2.引物长度一般在17-25碱基之间，上下游引 ...
引子：从06年12月份开始，断断续续做了一个多月的3’RACE，有了一些心得和体会。期间在丁香园看了很多前辈们分享的经验，受益匪浅。在这里，我就自己的经历略作总结，希望能给像我一样的新人们有点启示，少走些弯路，不当之处欢迎指正。一、试剂盒的选择：3’RACE从原理上就能明白，它比5’RACE 要容易得多，所以并不一定需要用进口试剂盒。原来准备用Takara 3’RACE的试剂盒，可是看了一下它的原理和内容，觉得挺挫的，自己DI ...
PCR Primer DesignBook DescriptionIn the past decade, molecular biology has been transformed from the art of cloning a single gene to a statistical science measuring and calculating properties of entire genomes. New high-throughput methods have been developed for genome sequencing ...
This protocol describes the detailed experimental procedure for real-time RT-PCR using SYBR Green I as mentioned in Xiaowei Wang and Brian Seed (2003) A PCRprimer bank for quantitative gene expression analysis. Nucleic Acids Research31(24): e154; pp.1-8. Please refer to this paper and the P ...
核酸版blast精华 【旧贴整理】关于blast 精华如何使用blast 请教如何使用blast 请教blast如何使用？ 轻轻的问：BLAST怎么用啊？ 怎么样操作Blast及其怎么分析可行性 求助•！！！BLAST如何使用？急！！！其它问题 关于BLAST的问题 blast的结果怎么看 求助！！！如何使用BLAST验证引物？ 求教：我看不懂这个Blast结果！ 请教有关BLAST的一个问题 请BLAST高手帮忙分析一下引物 请帮我看看我设计的引物怎样 blast的结果可 ...
Book Description:The BIOS Advanced Methods series is intended for advanced undergraduates, graduate students and established research scientists. Titles in this series are designed to cover current important areas of research in life sciences, and include both theoretical bac ...
1。real time PCR原理http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=3425617&sty=3&keywords=real+time+PCRhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1401010_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/4604271http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id ...
我先后用以下三对引物扩同一片断，退火温度在55-65度，都不出来。第三对引物Lup1我试过加1，1.5,2ulDMSO还是不出。我该怎么办？难道中间的n的个数不正确，n是两个contig之间的gap，这段序列是从ncbi的UCSC库中提取的。先谢过！Lep5:125-779bp=655bpF:Acccacaactccccttctg（19）R:Ccacacttacacaccgcact（20）Lep1:47-738=692b ...
本帖介绍了在PubMed主页进入引物blast的操作，有需要的战友可以浏览图片。稍等片刻，系统运行中~
Access RT-PCR System (Promega)DescriptionPromega’s Access RT-PCR System (a) is designed for the reverse transcription (RT) and polymerase chain reaction (PCR) amplification of a specific target RNA from either total RNA or mRNA (1). This one-tube, two-enzyme system provides sensiti ...
PCR版块FLASH动画汇总：思主任以前总结的部分链接：PCR版发布的网络资源FLASH汇总 A flash for RT-PCRPCR FlashPCR Flash推荐一个与RT-PCR有关的FlashA Flash of How RT-PCR is performedPCR-ELISADNA结构FlashPCR原理Primer Premier 5.0演示PCRRT-PCR admation RT-PCR 中文版PCR原理Polymerase Chain Reaction PCRR ...
以下是所有的看家基因的列表，大家在设计引物时，可以直接采用这些基因的序列，本表来自于Trends in Gentics上一篇文献，内容全面，所有的看家基因均标注了基因银行号（Genbank），可以直接到pubmed中查询得出。引物设计可以推荐用primer 5，也可以直接与fbzhang@hotmail.com联系，请注明：引物设计服务， 同时提供您所需要的引物的基因银行编号或全部序列。List of housekeeping genes de ...
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污 染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.一、污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶 或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染. (二)PCR试剂的污染:主要是由于在P ...
目的基因的亚克隆所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆，其目的在于对目的DNA进行进一步分析，或者进行重组改造等。亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。一、试剂准备1．LB液体培养基：胰化蛋白胨（细菌培养用）10g，酵母提取物（细菌培养用） 5g，NaCl 10g，加ddH2O 至1000ml，完全溶解，分装小瓶，15lbf/in2高 ...
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