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qiubiaodsg 我最近在做pull down 实验，先用western blot 标记的是被拉的蛋白，结果片子上是一片白板，连作为对照的input（只有被拉的蛋白）都没曝出来，请各位高手知道一下吧，谢谢。本人western 没有问题。dianaofyezi 如果连对照都没有出来，就首先应该考虑程序流程的问题，无论是否发生了pull down，起码对照应该成立不是么？然后再考虑的是相互作用的蛋白的问题。poriae if the input is not goo ...

surgerybaoyu 请教下各位前辈，我收集术后引流液想检测蛋白分子，但是这个腹膜液中由于手术原因带有血液，而且发生了溶血，想问下对于这种检测上清液中的蛋白影响大嘛？还能测吗？有什么办法解决？或者经验借鉴？谢谢，不甚感激freecell 检测什么蛋白分子？surgerybaoyu freecell wrote:检测什么蛋白分子？TPA、PAI本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可 ...

杀破郎jimmy vasa 的全称是什么啊？谢谢高手指教！freecell 这个应该是个拉丁名吧，不是什么缩写。Among the components of Drosophila germplasm such asOskar, Vasa, Nanos and Tudor, which have been molecularlyidentified, vasa is the best characterized and encodes aDEAD-family protein of ATP-dependent RNA helic ...

馨er 我在做基因筛查，发现了一个突变，而且氨基酸发生改变，我想用软件预测蛋白及蛋白功能有没有改变，怎么做？谢谢指教！freecell 我没有读过类似的文献，可以用软件来预测功能有没有改变。在这种情况下，个人认为就该基因表达产物的典型功能，做一个对比的实验。基本就能说明问题，证明是否有义突变。馨er 哦，问题是我这里不能做这方面的实验，我只能想办法用软件预测！希望多多指教！gingivalis 有没有这个蛋白质的三级结构？或者BL ...

xiaomao1260 各位战友，小弟刚入行，读文献时看见两种试验方法:减除杂交和表象差异分析法。想各位请教这两种方法的实验原理，基本步骤，和用途。谢谢！freecell 请提供相关名词的英文名称。xiaomao1260 减除杂交subtractive hybridization表象差异分析法representational difference analysisziyunfei 中文翻译是消减杂交，是一种以PPCR subtraction ...

1yangz 我是要做一个与凋亡相关的基因的凋亡通路那我的试验设计你们看看这样设计可以不？我先通过重组真核表达质粒转染细胞然后检测各项凋亡指标证明该基因确实可以诱导凋亡然后我从文献上得知该凋亡通路与ERK1/2 and p38 MAP kinases相关，那接下来的试验我该如何设计啊？凋亡需要做几项哪几种的啊？特别是关于ERK1/2 and p38 MAP kinases 凋亡通路的设计该如何进行谢谢了，祈望各路大侠不吝赐教我QQ是30406 ...

xiaoxiaoxiao110 怎么样从一段基因上寻找启动子呀及其-10区和-35区freecell try google: online promoter predictionso many results:http://molbiol-tools.ca/Promoters.htmxiaoxiaoxiao110 为什么我看的这个文献-10区是GCAGCG，而不包括TATAA这几个碱基呢ziyunfei punmed 找基因序列，cDNA序列，找出转录起 ...

bashubuyi MERERK跟MAPK什么联系是ERK/MAPK信号通路还是还是ERK1/2/MAPK通路1/2是什么意思，freecell google了一下，“1/2”是指ERK-1/ERK-2。The extracellular signal-regulated kinases 1 and 2 (ERK1 and ERK2), also called p44 and p42 MAP kinases, are members of the Mitogen Activated Protein Kinase (MA ...

快乐无罪baby 能不能多举几个与凋亡有关的信号通路，如有相关文献更好谢谢！chuckdouble pathway from the homepage of CELLSIGNALlvmanrong 楼主，能看看原文吗？redbri 楼上的图片很全面，线粒体通路，内质网通路和Fas通路，不过这个图对于初学者来说，是很难的。可以分别搜一下这种通路的信号图，就比较容易理解的。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你 ...

zhenyuyll194 在这请教各位大侠，若想找到一个疾病的基因缺陷比如某个先天性疾病，应该如何着手？请多指点！多谢！lqz816 是医学吗？是植物的话就好办，图位克隆就成。我是搞植物的，对人体外行，瞎说说啊：1、先要调查遗传规律吧，2、先检查染色体形态有没有巨大的缺失等变异，如果没有差异就下一步3、如果病是由于基因不表达或表达失控引起：做芯片，看表达差异，则可能发现候选基因。4、如果基因表达没有差异，就看序列差异，如果病是 ...

allwish 请问有人去过这个miRNA的第一期培训班吗？不知道质量如何http://tong.dxy.cn/upload/2009/LAND/index.html坏才不遇 我也想知道 啊wshuangwei2005 这里有个他们上期举办的培训班，里边好像有些人报过名。或许可以询问下，吼吼。祝好运http://www.dxy.cn/bbs/thread/13837221kiki2009 贼贵的，期待所有资料！本文由丁香园论坛提供，想了解更多 ...

licanming 请问大家用sigma公司的PMA时，储存液的浓度是配多少的？保存期多长？我是准备用DMSO配，我看说明书的意思是储存液浓度为20mM，但我工作液的浓度只要100nM，故很难分装和稀释。如果储存液浓度低一点，会不会对保存时间产生影响啊？我在园子里搜过，有用1mg/ml的，但我不知他是否用sigma公司的。licanming 自己顶一下amygdala 对于保存而言当然是浓度越高越好，稀释1万倍也是很正常的 ...

hhppli 我的实验：利用流式细胞仪检测乳酸菌的细胞膜完整性，采用荧光染料PI染色，样液只是乳酸菌的纯培养液，没有其它杂菌，得到的流式细胞二维图，见附件，左下为活细胞，右下为死细胞。发表文章后，编辑让我解释四个象限，并问为什么“左下为活细胞，右下为死细胞”。第二个编辑问的问题就更麻烦了：I miss percentage values on the quadrants and maybe a pseudocolour plot to better evaluate the am ...

bluejy 本人打算做甲基化特异性PCR观察用药之后，抑癌基因的甲基化状态。看了一些文献，关于与MSP一道做的基因表达，一般选用RT-PCR，弱弱的问一下，为什么不做Real time PCR 呢？这两个技术所需的经费好像也不差多少。slytjiaofei RT-PCR是一种半定量，而Real time PCR是一种定量方法，如果你的涉及仅仅是观察药物处理后甲基化改变及其对相关基因表达的影响（升高或降低），用前者即可；如果是想准确观察升高 ...

zry0803 大家好！请教一个问题如何确定某一中微生物，如细菌、寄生虫等体内是否含有某条信号传导通路？几十个字里面几个错别字，电脑真是害死人。freecell 一般是利用抗体将某个标志性信号分子blocking，然后检测下游信号分子的改变。zry0803 感谢，用抑制剂也可以吧？xiongran 你首先要知道这条信号通路，比如jak-stat或者nf-kb信号通路，至少一些中间分子在你的物种中是存在的，然后再通过报告基因证明， ...

吴佰霖 老板的一个课题，一个分泌性蛋白，可结合一些小分子，与膜上受体结合，但是用重组表达的蛋白与 pcDNA过表达这个蛋白的生物学效果不一样请问有什么研究策略吗freecell 你的研究材料？ 研究目的？吴佰霖 材料：细胞系，酵母表达重组蛋白，pcDNA表达克隆载体，研究目的是分泌性蛋白结合受体后在胞内的信号通路，或相关作用分子xiongran 在下游构建一个报告基因，至于上游可以是配体分子表达以后与受体结合激活信号通路，有的情况下 ...

licanming 请问有无人用过assaydesigns公司的PKC Kinase Activity Assay Kit（cat NO:EKS-420A）?可否说一下应用的经验？注意事项等？还有，该试剂盒的说明书有几处地方不是很懂，请大家帮忙看一下：1、To avoid cross contamination, change disposable pipette tips between the addition of each standard, sample, and reagent and add to ...

表皮葡萄 ExoS is flanked by 10 base pair repeats that are only present as a single copy in non-ExoS-encoding strains, consistent with horizontal gene transfer.zhujoker 我来试一试哈，对不对就是你自己慎重选择了。ExoS与非ExoS编码链不同之处在于ExoS侧翼有10个碱基的重复序列，而非ExoS编码链侧翼只有一个单拷贝，与基因转移水平具有一致性。 ...

tigerbin 请教各位大侠：有没有研究microRNA与树突状细胞免疫功能方面的？现在microRNA的研究已经遍及肿瘤，免疫，心血管疾病，病毒等，如miR-155,有关它与免疫的研究，本人看的几篇文献主要是利用转基因技术敲除小鼠体内Bic基因（miR-155系BIC基因的表达产物，产生于活化的B细胞、T细胞、巨噬细胞、树突状细胞等），检测bic／miR-155-/-小鼠B,T,DC细胞分化，成熟，活化情况，及功能改变等。m ...

alterego 查阅了很多文献，结果把自己越搞越糊涂了因为是做阳离子的复合载体，主要是用PEI进行siRNA的静电吸附，PEI经过修饰之后，氨基有所变化，已经通过化学的比色法进行残余氨基测定，可以确定氨基残基（N）的mol数但是每个mol的21nt的双链siRNA（19对RNA，undefined2个嵌合DNA，很经典的搭配）中磷酸集团（P）应该算成几个mol呢？查阅了许多类似的siRNA文献，都没有正面说这个问题。DNA的东西貌 ...