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表皮葡萄 ExoS is flanked by 10 base pair repeats that are only present as a single copy in non-ExoS-encoding strains, consistent with horizontal gene transfer.zhujoker 我来试一试哈，对不对就是你自己慎重选择了。ExoS与非ExoS编码链不同之处在于ExoS侧翼有10个碱基的重复序列，而非ExoS编码链侧翼只有一个单拷贝，与基因转移水平具有一致性。 ...

tigerbin 请教各位大侠：有没有研究microRNA与树突状细胞免疫功能方面的？现在microRNA的研究已经遍及肿瘤，免疫，心血管疾病，病毒等，如miR-155,有关它与免疫的研究，本人看的几篇文献主要是利用转基因技术敲除小鼠体内Bic基因（miR-155系BIC基因的表达产物，产生于活化的B细胞、T细胞、巨噬细胞、树突状细胞等），检测bic／miR-155-/-小鼠B,T,DC细胞分化，成熟，活化情况，及功能改变等。m ...

alterego 查阅了很多文献，结果把自己越搞越糊涂了因为是做阳离子的复合载体，主要是用PEI进行siRNA的静电吸附，PEI经过修饰之后，氨基有所变化，已经通过化学的比色法进行残余氨基测定，可以确定氨基残基（N）的mol数但是每个mol的21nt的双链siRNA（19对RNA，undefined2个嵌合DNA，很经典的搭配）中磷酸集团（P）应该算成几个mol呢？查阅了许多类似的siRNA文献，都没有正面说这个问题。DNA的东西貌 ...

chenke520520 本人做转染实验，由于小鼠的细胞实在是养不活，我能否将小鼠的insig-1基因（insulin induce gene-1）转染到大鼠细胞中？能否其发挥功能？急！请战友们解答！谢谢！shao74 可以。你是需要稳定表达还是瞬间表达？若稳定表达，你可采取病毒感染的方式，如曼病毒；逆转录病毒和腺病毒；若后者你可用一般的转染方式就够了，这样一般可持续7天左右。hustokyo 不同种属的基因和细胞，外源基因表达出的蛋白 ...

hbykkl FISH中如何去除宫颈癌中的角化蛋白以更好暴露核酸。宫颈癌或肺鳞状细胞癌中有大量角化蛋白，在FISH中可以激发荧光，并且影响探针杂交，有什么好的方法去除角化蛋白？我们用水煮法效果不是太好。鳞癌中的角蛋白是和成分？Fasta921 是否可以考虑用蛋白酶处理一下？spaceyak 建议用蛋白酶消化，细胞涂片也可以用蛋白酶消化的。SSC老化之后用50ug/ml的蛋白酶K（Merck） 37度消化7分钟（请自己按实际情况 ...

水仙子2005 我想分别构建FOXO1 和 SIRT1基因启动子/luciferase报告质粒，用于研究X基因是否能够调控这两个启动子。但是不知道该扩增两个基因启动子区域的哪一段插入pGL3（promega）中。另外，promega的pGL3有pGL3-basic和pGL3-enhancer，该选择哪个？水仙子2005 继续求助sxd5266 pGL3-basic 没有SV40增强子pGL3-enhancer 有SV40增强子研究启动子 ...

金鱼公主 谢谢回复Fasta921 细胞中蛋白跨膜运输一般是：在蛋白质合成之后才进行的，跨膜前须从折叠状态转变为解折叠状态。生理状态下这个过程涉及到伴侣分子协助及信号肽指引，如果人工操作，对于完整蛋白的解折叠状态相对比较难把握！可能合成跨膜a螺旋先与膜脂双分子层结合后再与两侧蛋白连接更可控些。PS：建议查阅相关文献，纸上谈兵有时行不通的。金鱼公主 Fasta921 wrote:细胞中蛋白跨膜运输一般是：在蛋白质合成之后才进行 ...

nemo2004 想做一段多肽用来免疫 不过太小 不好表达也不好纯化 想把它与一个大的蛋白放在一起共同表达使他们连起来 纯化这个大的蛋白 不过不能让这个蛋白的四级结构把多肽包裹起来。。。 求助技术。。。freecell 可以试试用HBV的核心抗原藕联。orphean 免疫：多肽可联KLH或BSA纯化抗体：多肽直接连填料就行了。你所谓的纯化是指这个嘛？xuezhishui 建议构建多肽的串联体，这样免疫原性强，而且省去了大蛋白质的影响，否则纯化的产物中 ...

zxhuang209 请问：荧光标记二抗除了红、绿、蓝。还有其他颜色的吗？talitha 这里有个列举，lz去看看吧，荧光染料还是很多的，但要看你的滤色块是否够用。http://www.microimage.com.cn/bbs/read.php?tid=3726zxhuang209 thanks a lot本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongco ...

shiliushi 请教各位，用于细胞学实验的多肽的纯度要求至少多少呢？98%以上还是95%以上？freecell 个人认为： 越纯越好，最少95%。dianaofyezi 最好是能够达到98%。如果某些多肽合成困难，至少也是需要95%shiliushi 十分感谢！威斯腾 如果是制备抗体95%以上甚至是99%比较好，需要资料留下邮箱我发个大家本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

yiyi1983966 检测苏氨酸磷酸化Akt与丝氨酸磷酸化Akt有区别吗？licanming 有区别的！要看你观察的实验指标与磷酸化哪个残基相关！如果未明确，只是想观察作用因素是否激活AKT，那可检测丝氨酸磷酸化Akt，因为AKT激活的磷酸化顺序一般是先苏氨酸磷酸化后丝氨酸磷酸化，即丝氨酸磷酸化后AKT一般都激活了。yiyi1983966 非常感谢！ 我还想麻烦问一下： 如果他人已经做过某作用因素对丝氨酸磷酸化AKT影响，有 ...

xiazq_0 我是新手。请问各位师兄，1、VEGF121在什么细胞里高表达？2、其发挥作用的基因片段是什么？谢谢了！freecell http://ajp.amjpathol.org/cgi/content/abstract/156/4/1469Human Vascular Endothelial Growth Factor121 (VEGF121), a 18 kDa protein consisting of 121 amino acid residues is produced as a hom ...

小猪默默 请教高人：我现在想用GFP做报告基因，在大肠杆菌中表达蛋白，想请教一下大家用GFP做报告基因是就是在含有GFP的质粒中扩GFP的全长吗？有没有人对GFP基因进行过改造？让报告基因的序列最短还能使表达的蛋白发荧光？Fasta921 1、如果你单纯想表达GFP蛋白，那么转化含GFP基因的表达载体即行。2、如果你想表达GFP融合蛋白，那么在GFP上游或下游插入目的基因即可。只是有些细节要注意的。3、有人改造GFP基 ...

bdvetywz 各位战友1想证实病毒感染小鼠后脑组织中是否存在凋亡并且要定量，有什么办法？2 如何做凋亡通路？需要测哪些指标，采用什么办法？magichunter 1.免疫组化，tunnel2.主要为western（caspase系列，bcl-2，bax，MAPKs，指标太多了）bdvetywz 主要可以测哪些指标magichunter 先做tunel吧，看看有没有凋亡再说。bdvetywz 已做，存在凋亡，现在想走通路，不知该做哪些？y ...

shiliushi 我在看文献的时候，不是十分明白用相对光单位/mg 蛋白表示转染效率，相对光单位的值多大才表示转染效率高（50左右）呢？freecell 把文献贴出来。shiliushi Figure 7. In vitro and In vivo gene delivery assay by using GE11 peptide as the targeting element. A) Transfection efficiencies of various PEI, ePEI, or gPEI polyplexes in SMMC- ...

bdvetywz 各位战友，如何做凋亡通路？需要测哪些指标？如何证实动物是由于凋亡过度造成死亡的？谢谢!pingping05 你好！凋亡的检测指标非常多，比如说Hoechst 染色，形态学观察，流式，Tunnel,DNA-ladder等等，其中凋亡检测的金标准为TUNNEL和DNA-ladder,这两者 都可以定性和半定量表达凋亡的发生及其凋亡量的变化！magichunter 我觉得凋亡检测的金标准应该是电镜结果，tunnel不应算 ...

receptorr 我在做HaCaT细胞的磷酸化Akt(473)时，背景比较高，该怎么办？（即未处理组的Akt比较高）请高手支招。谢谢magichunter 说得太粗略了。receptorr 我做的细胞是HaCaT看看加入药物后HaCaT的磷酸化Akt是否有增高，所以希望没有加药的那一组HaCaT的磷酸化Akt水平低但是实际做时，发现没有加药的那一组HaCaT的磷酸化Akt水平比较高所以想问问各位高人，有什么办法把没有加 ...

tsfkyh 做的目的蛋白，用药物处理后蛋白水平明显增高，想在转录水平研究一下，药物处理后，相应的核转录因子受体与目的基因启动子序列上元件结合。做了报告基因载体想检测目的基因启动子活性，但做了几次基本没有变化，我想知道这是由于哪种原因造成的? 使用的EL4细胞做的转染，文献报道过的，都是使用这种细胞研究白介素5的启动子活性的。我使用的启动子片段大小为-1275~+45，目前我怀疑可能我所用的启动子片段中可能含有某种抑制 ...

sumu2006 我买了细胞线粒体分离试剂盒，想用于分离血小板线粒体。查文献发现有专门的血小板线粒体分离试剂盒。不想浪费之前的试剂盒，不知能否用于血小板，哪位高人可以指点下？万分感谢！Fasta921 两种试剂盒方法比较一下。再根据血小板小，无核等特点作出修改！dpw147 楼主你好，我想知道，你搞明白细胞的和血小板的线粒体分离试剂盒是否一样可用于血小板的线粒体分离？我现在也是买了细胞线粒体分离试剂盒。。。但要分的是血小板的 ...

shanshuiqing 据说金黄地鼠的基因组序列已出,可我搜索了很久均未搜到,想请问各位高人金黄地鼠的基因组序列是否真的已出,如果出来到哪里搜索.不好意思,我问的可能有点不清楚,我指的是金黄地鼠的全基因组序列,NCBI上未报道！shanshuiqing 自己顶一下!freecell http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Database/hkj710 你是做金黄地鼠什么方向的啊，我是做生物节律的，金黄地鼠的全基因 ...