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yeselanshan 本人正进行RNA干扰筛选实验，筛选模型已构建成功，但shRNA文库构建一直没有成功，导致实验受阻。哪位达人能否提供siRNA文库或shRNA文库帮助，接受有偿提供。谢谢各位。willion1985 www.sirna.cnxujian2004265 再打广告，封！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcomi ...

perpetuity_love 请问有谁正在做RNAa的研究，麻烦留个言，我想了解一下国内这方面的研究进展。zhujoker 在Pubmed里面使用RNAa搜索一下不就什么都搞定了？freecell http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0008848# What is RNAa?RNAa or RNA activation is a novel small RNA-media ...

mijiagaga 有郁闷问题想请教各位大侠：我做免疫共沉淀，从细胞中提取内源性表达的蛋白，按照常规方法做，可是最后银染总是没有条带？多谢多谢！woxingwosu 有几个问题需要确认一下：1. 你做免疫共沉淀（IP）的抗体是否可以用。WEstern能识别的抗体不一定能用在IP。2. 内源性蛋白的表达量。需要先确认一下这个蛋白的表达量，如果这个蛋白本来表达量就很低，那么做IP的难度就很大，这时候需要考虑过量表达这个蛋白了。或者需要 ...

sunside 大家好，最近在准备做DNA甲基化方面，想提取足够样本后一块做。请问提取人血样本后如何保存，是-20还是-80度保存？可以保存多长时间？我查了些，有人说解冻后会有溶血，对DNA提取有影响吗？另外想问一下，长期保存血样本对DNA甲基化程度会不会有影响？非常感谢！！！zhujoker 其实是抽了血样本以后立即提取DNA是最好的，不需要将血冻起来。长期保存血样本对DNA甲基化程度没有影响，但是时间长了就会丢失一部分 ...

lsdcfhyj 想请教大家，在我研究的信号转导通路中，转录因子要形成二聚体转移到核内与调控序列结合启动后续目的基因的表达，报告基因质粒含转录因子调控序列和荧光素酶基因，我在想如果用瞬时转染的话，那么质粒只在细胞质之中，并未整合到核基因组中，转录因子又必须是要转入核内与调控序列结合启动荧光素酶表达的，那瞬时转染质粒的细胞能用于报告基因分析吗？woxingwosu 用瞬时转染是可以用来做报告基因分析的，这类的例子不在 ...

piaoxue2320 哪位大虾survivin的vector，能否借我一点。实验急需。万分感谢。还有谁用过survivin的siRNA效果比较好的，可以告诉我哪家公司的吗？谢谢了。zitong1983 表达质粒免费赠送倒无所谓，siRNA也要蹭别人的有点为难别人啊，这东西不便宜啊shutaozheng_824 嗯，siRNA合成价格蛮高的！上海吉玛（**~B公司专项做目的基因的siRNA的！蛮不错的！参照网页：http://www ...

霍墨轩 :):D8D:I;)ssycock 刚好有，给你发过去了osto 好人啊 可否给我也发一份 sunshineyg01@yahoo.com.cn 谢谢了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

天心令 本虾米急需知道puromycin resistance protein （puroR）的KDa量是多少在google上，pubmed上，搜了好些天，都没有搜到请高手们指点指点在pubmed的protein上搜索，它有氨基酸数目的显示，但没有分子量的显示。谢谢各位先woxingwosu 最好把你的搜索到结果的网页发出来，或者是pubmed的地址，这样才好给你分析。那你有没有找到puroR的基因序列呢？如果有的话，可以自己通 ...

winniw214 有一个蛋白，我想把它denature之后再进行refolding。（这样可以加入一些调节因子之类的）我想问问具体的方法。网上搜到的都语焉不详。最好有buffer配方和步骤。有相关参考文献也好。谢谢！！蛋白大小为27kD.N端亲水，C端疏水。全蛋白不溶zhujoker 请参考以下两个链接：http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=F5674C5F-89 ...

三叶虫 大家好，由于我的基础不太扎实，希望各位战友能告诉我，这种是什么实验方法。简单说明其过程。1，transgenic mice that overexpress Runx2 under the control of a 2.3-kb mouse Col1a1 promoter。2，In dn-Runx2 transgenic mice under the control of the same2.3-kb mouse Col1a1 promoter。问题一，是上面是通过什么方法进行基因改造的，望战友简单说说其过 ...

fanghuan1986 肝病患者外周血中怎么能检测到肝组织中的人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA和甲胎蛋白mRNA 呢？本人认为转录水平应该发生在肝细胞中的，外周血中应该检测不到转录水平。恳请给予指教，不胜感激。woxingwosu 现在的研究已经表明了人的外周血中确实存在DNA和mRNA（Circulating DNA or RNA），一些癌症的患者（肝癌，肠癌，乳腺癌等等）的外周血中的一些mRNA含量有所增加，从而可以用来作 ...

wcqworld 请教各位老师：假设我想研究一类因子（配体）是如何作用于细胞膜上的两个受体并诱导细胞发生功能变化的，请问的是，构建完两个受体的RNAI载体，通过分组后转染，分别进行单一受体基因的抑制和两种基因的抑制，那么是否会获得好的效果，干扰只是影响新蛋白的合成，原来形成的在膜上的蛋白不是还存在，会存在多久？这样是不是不可行啊，长效表达载体构建后离体在在体试验分别要处理多长时间后才能进行效果检测啊！ylhuang ...

leo_tao_jesus 本人想做关于microRNA方面的研究，现在刚刚入门，请大家帮帮忙分享下手头的文献。。十分感谢！zhujoker http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/?term=let-7中文的吧你就在万方里面找吧，很多的！leo_tao_jesus 谢谢啦~~恋梅时节 cell的一篇关于let-7家族对RAs的调控，希望对你有帮助！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验 ...

新手上路多包涵 拟通过体内外实验证明某化合物的神经毒性（通过Ca2+-CaMKII-CREB途径），设计如下，第一次做这样的实验，真心的、虚心请教各位老师指点初步设计为：“由氧化应激导致兴奋性氨基酸增加，通过NMDA受体激活钙通道”1、体内试验染毒后，取脑海马进行如下检测：采用邻苯二醛柱前衍生高效液相色谱法检测仔鼠海马兴奋性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)含量；利用NO和NOS试剂盒测定NO含量和NOS活性；采用Fura-2荧 ...

chenccy 各位老师好，我想问一下，如何寻找一个已知蛋白和其他因子是否结合，以及探寻该蛋白是否作用某些未知的基因？问题问的不好，希望各位老师能帮忙吴佰霖 Co-IP,打质谱woxingwosu 1） 如果是要检验一个蛋白和另外的一个目的蛋白是否结合，有很多方法，包括免疫共沉淀（IP）,pulldown（包括GST和His tag的pulldown等等），免疫荧光染色共定位，BIACORE，FRET（或者BRET）甚至还有超速离心的方 ...

青鸟使者 小弟刚接触细胞信号转导，做VEGFR-2，有个基础的菜鸟问题，VEGFR-2有6个自磷酸化位点，我做的是抑制其磷酸化的小分子抑制剂，观察其对VEGFR-2磷酸化的抑制作用，那western-blot时选哪个磷酸化位点的抗体检测好呢？还是都一样？先谢谢高手相助！xb0810 应该先看看文献，一般下游不同的分支的激活可能与不同的位点磷酸化有关。shutaozheng_824 还是查SCI文献吧！信号通路研究中，Cell Si ...

梦话小子 大家给推荐几本实用的分子生物学实验技术的参考书吧，最好是带有原理及常见问题解答的，谢啦！jian_an1 分子 克隆yueweilei 我们实验室也是用的Molecular clonging，挺好的！恋梅时节 刚找到一个，挺好的！huerduo 谢了恋梅时节ulicy1 这个可以不？万流归宗 谢谢了，我也有同样的问题，刚开始准备实验本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄 ...

阳光男孩儿 我现在关注的那个基因在一个模式生物中，只有一个拷贝。我想研究在另一个模式生物中的同源基因，检索数据库发现，在这个我想研究的模式生物中，此基因有两个同源基因，同源性在98%，而且此基因是高GC含量的基因，GC含量在某些区段在70%以上。我想通过RACE方法，得到全长cDNA，然后做克隆，及表达分析，但我目前遇到的问题是，如此高同源性的基因，我用RACE的方法，是否能将两个基因分别克隆出来，有没有更好的方法，使得 ...

yunasha1986 我想咨询一下你们公司能不能帮助检测人类细胞的microRNA表达谱，我有正常的大肠癌HT-29细胞，以及RNA干扰后的HT-29细胞，我想检测对比下两类细胞microRNA表达谱的变化情况，特别需要包含miR-183,miR-1224-3p,miR-1184,miR-1205,miR-1207-5p,miR-486-3p,miR-423-5p,miR198,miR-455-3p,miR-214,miR-922 ...

light666 miRNA序列比较短小，用探针检测时设计难度比较大，因而许多文章都推荐使用MGB探针。但是不是一定要用MGB探针呢？毕竟MGB比较贵，普通TaqMan探针虽然也不便宜，但比MGB已经便宜不少了。light666 看了不少文章，用的都是 Taqman MicroRNA assays。请问高手们，这个东西里面的TaqMan探针是MGB的吗？谢谢bluesteven 是的，里面的就是Taqman-MGB，我们以前用过，要是 ...