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yingxiongjms 我是trizol法提的大鼠胚胎组织的总rna，用普通1%琼脂糖凝胶110v电泳30min（听我们实验室的老师说不一定非用变性凝胶），请教每个泳道最前面模糊一片的是什么呢？后面三个亮点应该是rna吧？是不是降解的比较严重？yingxiongjms 图片在这里。ningmeng1119 有RNA的降解，还有你的核酸染料有没有问题，胶本身制作的有没有问题，都有待解决，建议你跑个Marker看一下本文由 ...

米迷二号 如题！大家帮帮忙啊！George2 我们经常用HEK293细胞做基因转染实验，事实上，该种细胞还是挺好转染的，我们用过Lipofeacmine2000(Invitrogen公司的)，还用过磷酸钙沉淀法（自己配制和试剂盒都用过），转染效率都很高，也很方便。hermer fugeneanniegood 我们用过磷酸钙和威格拉斯的转染试剂，磷酸钙试剂可以自己配制，物美价廉没有毒性。只要PH值调准，操作手法熟练呵呵转染效果是很 ...

256k 实验要抽血，提取血中的单核细胞、巨噬细胞、DC细胞，然后提取RNA。------------------------------------背景线。提取RNA不可能一次成功，如果多次做就要反复抽自己的血，太血腥也太打击积极性了。我设想：能否，分离出的单核细胞扩大培养，再传几代，以扩大细胞数目。问题：单核细胞能传代么？能扩大培养么？ningmeng1119 提取出来后你可以把细胞保存起来，需要的时候拿出来复苏直接提取RNA，可以试一下256k 谢谢 ，这也是 ...

zhoujz 伽马-分泌酶抑制剂DAPT的中文名字及价格。望各位江湖救急。谢谢！chayeerkaishui N- ［N- ( 3， 5- difluorophen-acetyl) - L- alanyl］ - S- phenylglycinet- butyl ester)氮- - S - 苯基甘氨酸丁酯reyesa http://www.selleck.cn/products/DAPT-GSI-IX.html这个公司国内有现货。可以打折的。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫 ...

赵东生 各位老师师兄、师姐们！我用的是mirVana? PARIS? Kit 提取血清MicroRNA，提了半个月，OD值总在1.3左右。我是严格按照说明书来的，而且酚氯仿抽提那步，我也很小心确保不会吸到蛋白质。大家帮我分析一下，问题会出在哪里啊？zhujoker 使用是mirVana? PARIS? Kit 提取血清MicroRNA的260/280就是在1.3到1.4左右，这个不奇怪！赵东生 谢谢斑竹！它protocol上说纯化的RNA，OD在1.8-2 ...

青鸟使者 小弟最近在研究VEGFR2的一个小分子抑制剂，请问高手，使用20ng/ml 的VEGF刺激HUVEC细胞前需要去血清饥饿细胞吗？如果需要，要饥饿多长时间？青鸟使者 求助啊，有人知道吗？snowwinds 我们养的是肺上皮细胞。一般是无血清培养24h后加刺激因素。lij_try 青鸟使者，你好，我一直找不到HUVEC细胞，请问您能否送我一株该细胞？我的邮箱是:lij_try@163.com 方便告诉我您的联系方式吗？十分感谢！yin ...

yuhuashieasy 要用Compound C进行腹腔注射，sigma说Compound C在DMSO中的溶解度5mg/ml，但DMSO用于动物的浓度不能太高，按照这个溶解度的话，药液要稀释很多倍才能注射，可腹腔注射又不能太大量怎么办啊?Compound C的溶解度最大有多少啊？怎么办啊?Compound C的溶解度最大有多少啊？请各位做过的或者知道的大侠帮帮忙，很急，多谢了！vetboss yuhuashieasy wrote:要用 ...

chenlinana 各位战友，本人最近做p-caspase3的免疫组化染色，阳性结果明显，但是有一个奇怪的现象：说明书上p-caspase3是胞浆染色，但是我的片子是胞浆和胞核都染色，而且是胞核明显，查看了园子里的资料，有人提出凋亡细胞存在胞浆/胞核移位情况，但本人不明白这是什么意思，难道凋亡的细胞胞浆和胞核已经完全混淆了吗？请指教，是否有文献支持这种说法。chenlinana 怎么没有人回答呢，万分焦急。期待中......刺 ...

观天 有用钒酸钠（sodium orthovanadate）、氟化钠（sodium fluoride）做细胞培养抑制磷酸酶活性的吗？（不是提蛋白的cocktail）请问使用浓度是多少？有一篇paper配的钒酸钠stock pH=10,需要这么高吗？同一篇paper又-80°C保存，-20°C容易降解吗？观天 已经知道了。wangyananxy 同问，求楼上解答！谢谢观天 使用浓度因细胞而不同，可用MTT确定；配制：stock pH=10时以单体形式存在； ...

364587256 先谢谢各位大虾，小妹实验室新手，想做某个药物对EMT途径的抑制作用，涉及抑制PI3K/AKT途径。现在打算采用如下设计方法，**指正（作为硕士毕业论文）。1. TGF-beta刺激上皮细胞发生上皮间质转化（EMT），测上皮细胞指标（较无TGF-beta刺激组下降），间质细胞指标（较无TGF-beta刺激组上升），pAKT, AKT（较无TGF-beta刺激组升高）。2. 加入药物后，再次测上述指标（该药物是抑制EMT作用的） ...

wwdcom2 wwdcom2 这一现象已被重复很多次，也被其他学者所证实具体是这样的oxLDL刺激内皮细胞后，引起TGF-beta的表达增加，下游Smad3磷酸化并入核，在核内聚集。而TGF-beta/Smad3信号通路抗炎作用也已达成共识。可是没有学者给出oxLDL刺激后该信号通路增加后，与炎症蛋白同步的解释。我给老板的解释是oxLDL刺激后，诸如AP-1\NF-KB不能无限增加，而对抗因素-也就是诸如TGF-beta ...

timt75 如题，我要检测一个基因的外显子中某段polyA(10）是否存在缺失突变，应该如何检测？测序是否合适？测序后polyA后出现杂峰，测序能否看出缺失突变？后面的杂峰是杂合突变引起还是ployA本身检测引起？盼回复！谢谢！timt75 请帮忙！谢谢！zhujoker 最精确的还是应该是测序，“测序后polyA后出现杂峰，测序能否看出缺失突变？”我想问问你你是否测过，再说在这种情况下你问专门的测序公司的技术支持不是更好解 ...

紫琳儿 大家好，我想请教大家一个问题：今儿上午在实验室将 100mg TPCK和 1mg的 PD98059分别溶于1ml DMSO 溶解之后，将其抽取0.5ml加入到1.5ml的无血清RPMI-1640培养液中，TPCK立马就发生化学反应生成粉红色的混浊物。而PD98059静置几分钟后也变成了黄色的混浊物。但是之前PMA也是同样的方法先溶解于DMSO，再溶解无血清RPMI-1640培养液 中。没有浑浊现象发生。问题：1、为什么？2、如果我都用D ...

flower1946 菜鸟求助各位大虾，要做miRNA的实验，现已知可以查某个特定miRNA的有哪几个调节靶点，那反过来，如果要查调节某个特定蛋白（如MMP-7）的miRNA，该如何查呢？谢谢！zhujoker 可以使用targscan等软件啊，其实现在很多网站都有了，包括sigma也有一些预测flower1946 感谢楼上295546 TargetscanmiRdb本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及 ...

pollution_ocean 最近在筛选乳腺癌组织标本，发现了一个位点的突变，很是欣喜，结果查证后，发现原来是同义突变，不知道这样的同义突变在写文章或者是今后的研究当中是否还有意义呢？足下客 据我的了解，以前筛选与乳腺癌有关的SNP位点时，有一些同义突变的位点也是与癌症的发生显著相关的。但是这种情况不是很多。很大程度上要看运气了。bigbang_0_0 同义突变可能产生如下六种效应，其中的一种或几种可以用来解释患病机理：1 ...

dlh110 我构建了个microRNA的带GFP标签的质粒，不知道能不能与目的基因的3’UTR luciferase报告载体共转来检测luciferase的活性？bigbang_0_0 这个实验还要谨慎考虑一下，GFP的绿色荧光可能会干扰luciferase检测结果。另外你说的microRNA带GFP标签，你要保证两个东西都要有表达且保持活性，建议你最好把这两个东西构建成两个转录单位，由两个启动子分别起始两个东西的转 ...

xiaonichi 我现在在做一个蛋白，命名为fkbp38，按道理应该是38kd。因为同家族的fkbp12为108aa，约12kd但现在在ncbi上找到的序列，人的有413个aa，显示的分子量为44-45kd左右这是啥原因呢？xianyuanshan 楼主找到的是这个吗？—— NP_036313peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP8 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protei ...

lilyfisher 红色的是复制出的DNA，那么在后随链中的复制是不连续的，如“最后一个冈崎片段”所示，我想请教一下，是不是书上写错了，应该是5/呢，谢谢。slytjiaofei 书没有错，随从链最后复制完的是3’端，对于新合成的子链而言最后合成出的是5’端。lilyfisher 非常感谢您的帮助。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiong ...

lilyfisher 为什么叫做反向重复序列，我反着读没有读出什么规律，能不能指点一二？如铅笔所指。请问N指的是什么核苷酸，谢谢biolinkphilic 就是说双链DNA，从5‘端开始读序列是一样的。N指的是ATCG四者之一，不确定。lilyfisher 请问从5‘端开始读序列是一样的吗，我做出互补的另一条链AATANGTNT，不管是正着读还是反着读也是不一样啊，我哪里理解还不对。请指点下下，谢谢。lmnsmu 是4个反向重复 ...

sahalafeisha 我们之前在动物模型中检测microRNA方法用SYBR方法，没有用Taqman方法，内参用得是5s，现在想在细胞上作实验，仍然是先提取microRNA，再加尾POLYA，再反转录，然后SYBR方法PCR，是不是还可以继续用5s作内参，还是必须得换成U6，如果要换的话，求U6引物序列及方法，多谢各位高手～willion1985 还可以继续用5s作内参驼走西域 求5s 逆转录和RT-PCR上下游引物本文由 ...