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随着医学科学的不断进步，血液检验的项目不断增加，血液标本类别也越分越细，护理工作与检验工作协作关系日益密切。一个有价值的血液检验结果的产生，除了检验过程准确无误外，离不开血样标本的正确采集。因此，在采集血液标本时要规范，保证血液标本的质量，以提高检验结果的准确性。以下就标本问题和大家做一探讨说明。 一.了解检验目的，区分标本类别 根据检验目的和试剂类别，临床上将血液标本常分为生化标本、血常规标本、免疫标本、血清标本、血浆标本。根据标本的不同类别，所用的采血试管亦有所不同，可分为普通采血管、抗凝管、促凝管等。有些检验项目要用血清标本，如血糖；有些检验只能用血浆标本，如凝血功能；有些化验既可用血清又可用血浆做标本，如血钾。因此护士采血标本时，要看清检验申请单的目的，根据检验要求选择相应的试管采血，避免漏抽、重抽、错抽。例如医生开出一张检验申请单，要求检验电解质、肝功能、乙肝二对半时，如果片面理解就要抽三管血（电解质、生化、免疫），实际上综合分析后，只需采集一管普通生化血就够了。又如，有一张体检申请单内容罗列很多：电解质、肾功能、肝功能、凝血功能、乙肝、丙肝、梅毒、

在比较蛋白质组学中关于待测蛋白的数量、蛋白点的准确定量及其与质谱技术的兼容性研究过程中，双相凝胶电泳的染色是至关重要的一步。本章描述了多种与质谱技术兼容的用于凝胶染色的染料：考马斯亮蓝、硝酸银、Sypro Ruby、Deep Purple、5-十六碳酰基荧光素。

利用固定 pH 梯度（IPGs ) 进行的双向凝胶电泳和质谱鉴定蛋白质技术是目前蛋白质组分析的主要技术。利用双向电泳可以将非常复杂的蛋白质混合物根据等电点、分子质量、溶解性和相对丰度分离开来并得到完整蛋白质的图谱。图谱反映了蛋白表达、异形体或翻译后修饰的变化。双向电泳可以同时分离超过 5000 个 蛋白质（通常约 2000 个蛋白质），而且能够定量检测< l ng 的蛋白质点。如今采用 IPGs 的双向电泳已经克服了以前基于载体两性电解质的双向电泳中的一些限制，包括重复性，操作、分辨率、极端酸性和（或）碱性蛋白的分离。 pH 2.5~12 的 IPGs 的发展使人们能够分析极端碱性的蛋白并建立相应的数据库。窄 pH 范围的 IPGs 提高了分辨率（△pI=0.001)，并且配合预分离方法使用时可用于检测低丰度蛋白。本文介绍了 一种目前在植物蛋白质组分析中广泛使用的双向电泳方法，并详细描述了该技术中的各个步骤。

量子点是尺寸在 1-100 纳米的半导体材料（包括Ⅱ-Ⅵ族，Ⅲ-Ⅴ族，Ⅳ族等），具有明显的量子效应。与传统的有机荧光染料相比，具有灵敏度高，稳定性好，荧光寿命长等优势。量子点的特殊的光学性质使得它在光化学、分子生物学、医药学等研究中有极大的应用前景。量子点最有前途的应用领域就是作为荧光探针应用于生物体系。在荧光标记中，经常需要用多种颜色波长的量子点对不同物质进行标记，并且在同一激发光下，可同时进行观测。这需要有一系列波长的量子点可 ...

由于双向凝胶电泳对总蛋白具有杰出的分离能力，因此它能应用于所有类型蛋白质的分离。然而蛋白质的溶解性严重阻碍了许多种类蛋白质分析，尤其是膜蛋白的研究。主要是在提取和等电聚焦步骤出现这些问题，解决办法是设法改进在等电聚焦前溶解蛋白质的样品溶液。样品溶液经过离液剂和新去垢剂处理，从而提高蛋白质的溶解度。在膜蛋白质组学分析时加入这些化合物，是现在以及未来的讨论方向。

周围危机无处不在水质安全2013年杭州的草甘膦废液偷排污染大案中，自来水出现了明显异味，而环保部门检测自来水的各项指标全都合格；类似的河水变色发臭但环保部门检测合格的事件多有发生，严重影响了政府部门的公信力。食品安全食品安全领域问题也日益严峻，从含苏丹红的鸭蛋到含三聚氰胺的奶粉，从镉大米到毒胶囊，从苏丹红到双酚A，从地沟油到含苯水，从整容水果到人造肉，让人防不胜防。生物反恐国外动荡的政治局势给国内社会环境也带 ...

在所有活细胞中质膜（PM )作为细胞质和环境之间的界面而存在，并且是最复杂的和分化程度最高的膜之一。由于其中许多蛋白质参与了细胞的基本职能如细胞信号传递、渗透调节、营养和代谢，因此膜蛋白的鉴定和功能分析（无论是外在或内在的）是一个至关重要的挑战。分离 PM 的方法依据有机体、组织、细胞类型的不同而改变。本章主要是通过两相分离系统从拟南齐微粒体膜中分离 PM，主要运用不同膜具有不同的表面特性，质膜蛋白不能跨越脂质双层，并且经过双向电泳能很好复原。相比之下，跨膜蛋白质的复性首先需要从可溶性蛋白中除去质膜部分，要么是细胞内的污染物，或功能相关的蛋白质，其次是具体溶解方案的使用。本章介绍分离质膜的方案是基于膜的碱处理来溶解疏水性蛋白只增加它们在双向电泳凝胶中的复原性。高度疏水的水通道蛋白用于检测方案中相关物质。

植物细胞壁是植物细胞具有高动态和化学活性的组分。细胞壁主要成分是多糖类，以及约占细胞壁体积 10% 的蛋白质。这些蛋白质很难以高纯度从碳水化合物复合体基质中分离。基质不仅固着了蛋白质而且是后续 2-DE 分析的污染物。成熟植物组织由于形成了包含酚类混合物的次级细胞壁给分离工作带来了更大的挑战。本章将讨论细胞壁中蛋白质的提取并且介绍一种从紫花苜蓿茎中分离细胞壁蛋白质的具体方法。包括研磨裂解细胞的方法，把细胞质蛋白和小分子污染物去除的多种洗溱方法包括水和有机溶剂的方法以及两种不同的盐抽提的方法。其中盐抽提的方法能够从紫花苜蓿茎的细胞壁中获得高浓度的细胞壁蛋白质片段。经过商业纯化试剂盒处理后，蛋白质提取物进行高质量和高分辨率的 2-DE 分离，从而能够通过质谱的方法较容易地得到鉴定。

亚细胞组分如细胞核的蛋白质组的完整性很大程度上由纯化过程中是否将其他细胞污染物从分离到的组分中除去决定。从植物中分离高纯度的细胞核是一个困难的任务。尽管如此，通过一系列的分离步骤，人们已经能够纯化细胞核。最初，人们利用 2.0 mol/L 蔗糖密度梯度离心或 Percoll 密度梯度离心的方法从水稻悬浮细胞中分离细胞核。Morre 和 Anderson 报道了的一种改进的蔗糖密度梯度离心方法。该方法被证明能从水稻悬浮细胞中更加快速有效地提取核。细胞核是平均直径约 20 μm 的均匀球体。核蛋白使用裂解缓冲液或 SDS 样品缓冲液由纯化后的核中制备得到。核蛋白的纯度通过使用抗组蛋白 H1 抗体的 Western 杂交分析来评估。抗组蛋白 H1 抗体是一种核蛋白的特异抗体。我们在核组分中发现组蛋白 H1，但上清液中没有。这说明制备产物富含核蛋白。

核蛋白的分离和提取促进了植物蛋白质组学的研究。这项技术依赖亚细胞分离，用其可以鉴别出一个亚细胞器的蛋白质组，这项技术也被用于细胞核。核蛋白质分离方法是根据在不同离子强度的缓冲液中蛋白质溶解度不同而提出的。这套物理标准，配合着某些步骤中其他试剂的使用，如去垢剂或酶，产生出的分离成分在功能上也得到了验证。这套方法可以出产 5 份馏分，第 1 份馏分中含有和核膜及细胞骨架相关的蛋白质。第 2 份馏分可以溶于低离子强度浓度，含有活跃于核 RNA 代谢的核糖核蛋白。在增加离子强度和用脱氧核糖核酸酶酶解之后，会产生染色质馏分。最后，将得到有关核基质的第 4 份和第 5 份馏分，它们会分别以溶解在高盐浓度溶液中或者以沉淀的形式存在，这种沉淀只有在超声波条件下，7 mol/L 尿素中溶解。这种方法有着宽泛的适应性，可以应用于基因组未测序的植物中。总之，利用本章中讲述的提取方法的功能性标准可得到有价值的、有用的信息。

植物细胞线粒体执行着一系列重要的生化过程。其中最重要的就是通过三羧酸循环（TCA)氧化降解有机酸的反应。这一反应过程中发生了一系列经由电子传递链的电子传递反应，同时生成 ATP。除此之外，线粒体还具有许多其他重要的功能，如核酸、氨基酸、脂质及维生素等有机化合物的合成，从胞质中通过其膜上蛋白复合体输入蛋白质及代谢物，感受细胞外信号（如氧化环境），影响植物细胞的程序性死亡等。线粒体含有自身的遗传物质DNA，因此，其内也能发生转录和反应等生化过程。要想全面准确地阐明线粒体的产生、功能及其与细胞核之间的信号交换机制，就必须对线粒体的蛋白质构成有比较详细的了解。分离线粒体并对分析其蛋白质组在线粒体发育和应答外界环境信号过程中的变化的工作已有进行。本章主要提供一种从植物不同组织中分离线粒体，并对线粒体进行保存和纯度测定的方法。同时，提供了对线粒体膜结构以及基质内可溶性蛋白质进行分级分离的方法。最后所得的样品适合于进行线粒体蛋白质组分析。

本章介绍了一种简单实用的大规模分离纯化叶绿体的方法。本方法的优点是产量高、污染低并且蛋白质的降解少。分离出来的叶绿体样品适用于进行蛋白质组分析。

在这一章内，我们将介绍一种从木材形成的组织（分化中的次生木质部）中提取总蛋白的方案。这套方案被用于一系列的阔叶植物（ 橡树和白杨）和针叶植物（松树）的植物器官（根、叶、花粉、芽、花、形成层和韧皮部）。蛋白质首先在液氮中用 TCA-丙酮方法从粉末状组织中提取出来溶解在缓冲液中。2D凝胶实验结果可参见：http：//cbi.labri.fr/outils/protic/index.php.

众所周知，高等植物体内木质部和初皮部的维管负责长距离运输营养小分子。但是人们并没有预计到这两种运输汁液中也存在蛋白质，对于这些蛋白质的功能没有深入地研究。本章中将要描述如何从木质部和初皮部的汁液中提取及提纯蛋白质进行蛋白质组学分析。

种子中可能含有不同的成分，像淀粉和多糖，它们会严重降低蛋白质的提取量。谷类植物种子中的蛋白质据其溶解性通常分为 4 类：白蛋白（albumin) 、球蛋白 (globulin) 、醇溶蛋白（prolamin) 和谷蛋白（glutelin) ，它们可以分别提取出来。本章描述一种从绿色种子或未成熟的谷类植物子粒中提取蛋白质的方法。改良了多个步骤以提取以下蛋白质：① 所有的贮藏蛋白质 ( 大部分的醇溶蛋白和谷蛋白）；② 用盐缓冲液提取白蛋白-球蛋白；③ 使用相分配法提取两性蛋白质；④ 强力吸附于或含于种子胚乳淀粉粒的蛋白质。这些方法已经成功应用于双向电泳和蛋白质组学分析。

蛋白质提取除了经典的三氯乙酸（TCA )/丙酮沉淀方法外，另一个可行的方法是苯酚提取法，该方法可以从富含多糖、脂质和酚类化合物的植物组织中有效地获得蛋白质，并去除非蛋白质成分。本章提出一种改良的实验方法，可用于双向电泳（2-DE) 和进一步的蛋白质组学研究。苯酚提取之后，蛋白质在甲醇中和乙酸铵一起沉淀，沉淀重悬于等电聚焦缓冲液（isoelectric focusing buffer) ，电泳前用改良的 BradfordA ssay 方法测定蛋白质浓度。 成功使用这个方案的关键点有两个：① 在第一步中使样品保持低温状态；② 在离心后小心转移到苯酚层。

无论是保存还是运输，请避免反复冻融。反复冻融，冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构，导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变，从而降低抗体的结合能力，也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否，直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果，如果保存得当，Immune tech（苏州杰恩生物）的抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。1. 收到抗体和重组蛋白后的操作收到抗体和重组蛋白后（大部分抗体和重组蛋 ...

本章我们介绍一种适用于各种植物组织全蛋白抽提的高效方法。该方法利用三氯乙酸和含有巯基乙醇的丙酮在沉淀蛋白质的同时使其变性。同时，我们还将介绍分别在进行经典的 IEF 电泳或用IPG 胶条电泳之前的蛋白质溶解方法。整个过程简单易行，但在操作过程中必须注意以下两点：① 抽提必须在低温下进行；② 蛋白质溶解过程应在 22~25℃ 条件下进行以免尿素沉淀。

转基因风险评估对于相关的法规、通告和准则的决策过程起着重要作用。转基因风险评估最基本的作用之一是确保安全处理和控制转基因生物；另一个作用是评估对环境和人类健康存在的任何潜在影响。风险评估应该在科学的基础上回答所有“如果”情况下的影响因素。本章提供给广大科研人员有益的指南，帮助他们开展转基因生物风险评估工作。尽管我们参考的是英国和欧盟的法规，但是考虑到的基本原则和要点，适用于大部分国家。

随着转基因技术体系的发展，异源基因转入植物基因组已成为可能，这为植物育种家拓展遗传资源提供了一条新途径。转基因作物田间试验的设计与管理因目的不同而异。育种家分析转基因作物的基因型和表现型的稳定性，记录田间条件转基因纯合个体数的变化，并运用回交法将转化导入的基因转育到新受体基因型等。育种家还需要扩繁转基因作物，以获取足够的种子数量，分析有关性状，检验转基因系的田间表现、比较转基因材料与受体亲本之间的差异。在品种登记和释放之前，还需要开展品种的特异性、一致性和稳定性田间测定（ 即DUS测定）及栽培与利用评估试验（ 即 VCU试验）。转基因作物田间试验还包括一项特殊要求，即评估可能的环境风险。依据欧盟对转基因高等植物环境释放的2003/701/EC [ 1 ] 条例，特别注意监测转基因作物在大田环境下花粉的存活力和传播能力、基因转移的可能性、导入序列的表达产物的作用、基因型与表现型的不稳定性可能出现的有害效应等。