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研究体外培养细胞成功率．主要针对原代培养的动物和人的组织细胞，由于培养的目标细胞很多是成体细胞和分化终末的细胞，缺乏肿瘤细胞无限增值的能力。容易导致培养失败，为了在实验中提高原代培养的成功率，应注意一下几个方面的因素。一、取材(一) 细胞的种类根据实验的目的和要求，尽可能选择具有分裂增殖能力的细胞，如上皮细胞、成纤维细胞等。原代培养肿瘤细胞较正常细胞容易，成功率也较高。(二) 取材的部位在实验目的和要求允许的情况下．取材应 ...

虽然表观上简单，盘绕螺旋（coiled coil)模体是高度专一的，并在理解三级结构及其形成方面具有重要意义。最常观察到的盘绕螺旋形态——平行二聚态，其一般的结构类型仍有待全面的描述。尽管如此，其结构已呈现出在某些特定位置需要某些特定类型氨基酸的严格规则。本章我们基于现有盘绕螺旋结构，就应用这些规则到要设计或优化的盘绕螺旋结构来讨论这个系统。基于这些规则之上的理解和扩展，对这些模体的应用是关键的。因为，这些模体实际上在每个细胞过程中都起关键作用，它们通过屏蔽其他非天然的或不规则的蛋白质（如在肿瘤形成中跟盘绕螺旋结构域结合），作为药物投递试剂。我们讨论其结构中的 a 和 d 的 “疏水”核心位置以及 e 和 g 的“静电”边缘位置，在引导寡聚化和配对化的特异性作用。同样被讨论的还有那些在维持 a 螺旋倾向性、螺旋可溶性和二聚体稳定性上与 b、c 和 f 位有协同作用的位置。

表观遗传学是指表观遗传学改变 (DNA 甲基化、组蛋白修饰和非编码 RNA 如 miRNA) 对 表观基因组基因表达的调节，这种调节不依赖基因序列的改变且可遗传表观。因素如 DNA 甲基化、组蛋白修饰和 miRNA 是对环境刺激因素变化的反映，这些表观遗传学因素相互作用以调节基因表达，控制细胞表型，所有这些表观遗传学因素都是维持机体内环境稳定所必需的，有助于正常生理功能的发挥。组蛋白的翻译后修饰不仅与染色体的重塑和功能紧密相关，而且在决定细胞命运、细胞 ...

我并不认为“短”是一个值得追求的目标，“长”要适当，“短”也要适当，谁该“长”谁该“短”并不统一而论，有时和杂志、文章类型、作者年资、发表队伍地位等密切相关。我也谈谈，什么时候该“短”，什么时候该“长”。其实前面已经有人总结得更精辟，所谓“短”，不过是“精”。“精”是放之四海而皆准，“短”就不一定了。一，必须“短”的情况： 一些SCI杂志，限定在字数不得超过2500-3000单词。按照这个篇幅，根本没法长。如果一个作者写得很长，那么不好意思，编辑当 ...

从第一篇SCI（Molecular and cellular biology 6.188）到百篇SCI发表在数十个SCI杂志（包括Pediatric neurology 1.513； Journal ofbiological chemistry(JBC) 5.328；J clinical endocrinologyand metabolism :6.495；Lancet:33.633；Blood:10.558；Headache:2.642; BBRC; BritishJournal of ...

氨基酸类似物的掺入越来越有用。非天然氨基酸的定点掺入，使得运用化学生物学对特定蛋白质的研究和应用成为可能。但是，非天然氨基酸的整体掺入也检验着蛋白质组和基因编码假定。例如，有机体对非天然氨基酸的适应可能会导致新的基因编码。为了理解和定量化这样的掺入引起的变化，需理解微生物学和蛋白 质组对非天然氨基酸掺入的反应。此文描述了在蛋白质组范围鉴定这些掺入效应的规程。

计算方法一直在蛋白质设计中发挥重要作用。本工作主要集中在搜索蛋白质序列空间，以找到一条或数条与已知结构和功能相容的蛋白质序列。在期望的功能和结构限制下，概率性计算方法为所容许的氨基酸变化范围提供信息。这样的方法可用于指导 建立蛋白质的单个序列或组合库。

——专访深圳华因康基因科技有限公司创始人盛司潼博士

1. 先看摘要，了解内容及大概，多数文章只看摘要，少数精读文章必看全文2. 看图表，老外的文章里面图片都基本上能涵盖所有的你想知道的结果内容，看图表即可。3. 根据文章中的讨论或者前言部分引用的文章进行追踪，看其相关成果，搜索相关的后面的参看文献，对改类型研究进行了解。4. 尝试把自己看的文献进行笔记记录，归档，写一些短的review等。5. 看文献多了，就需要一些文献管理工具，我以前一直用的下载版的n种文献管理工具，缺点是用一段时间就 ...

1. 论坛求助：到丁香园论坛低分区和高分区找文献，也可到小木虫等论坛中找。我一直在丁香园论坛找文献，我的体会是低分区找文献相对较慢（一定按照版主规定的求助格式，否则他人不敢帮助查找，因为版主会扣分），但高分区一般短至几分钟找到，十分快。于是我就经常在论坛中其它版区交流、讨论，等获得10分以上时，我就可以进入高分区了。前提一定是先付出，后才会有很好的收获。2. 向作者求助：直接与文章中的通讯作者或第一作者用e-mail联系，一般 ...

我还是在校生，正值看文献、做课题的时期。关于如何在短时间内获取文献全文、如何高效地从阅读的文献中获取我们急需的知识和内容，正是急需了解的，在此提出自己的一些拙见，不到之处，请大家海涵，指正。一、关于如何短时间内获得文献全文1、已知所求文献为哪一篇的情况下： 利用Google学术搜索引擎http://scholar.google.com Google真是个好东西，灵活运用，不敢说无所不能，但确实非常强大。Google学术搜索你所 ...

1. 选题选题是写好文献综述的首要条件。选题要从实际出发，具有明确的目的性，在理论或实践上有一定意义。选题来源包括：1）与自己实际工作或科研工作有关的、较为熟悉的问题；2）某护理问题的研究今年来发展较快，需要综合评价；3）从掌握的大量文献中选择反映本学科的新理论、新技术或新动向的题目。 文献综述的题目不宜过大，越具体越容易收集资料，从某一个侧面入手，容易深入。2. 搜集资料文献资料是撰写文献综述的物质基础，选定综述的题材后要大量 ...

文献综述是对某一方面的专题搜集大量情报资料后经综合分析而写成的一种学术论文， 它是科学文献的一种。文献综述是反映当前某一领域中某分支学科或重要专题的最新进展、学术见解和建议的它往往能反映出有关问题的新动态、新趋势、新水平、新原理和新技术等等。学写综述，至少有以下好处：①通过搜集文献资料过程，可进一步熟悉医学文献的查找方法和资料的积累方法；在查找的过程中同时也扩大了知识面；②查找文献资料、写文献综述是临床科研选题及进 ...

鉴定蛋白激酶底物是蛋白激酶研究的一个主要焦点，并为解析信号转导途径及其复杂的调节提供证据。我们在此介绍一种以蛋白质芯片技术为基础的离体实验方法，用特异蛋白激酶对固定在芯片上的蛋白质进行系统磷酸化筛选。这种高通量方法可以用来鉴定可能的激酶底物。这个方法从包含数百个纯化重组的组氨酸标记蛋白质的植物蛋白质芯片开始，要用可溶解的、有活性的激酶，在具有放射性的 ATP 存在的环境下孵育芯片。一次芯片实验只需要少量有活性的激酶。然后用磷屏成像仪或 X 射线胶片检测放射性信号。在活体内激酶与底物不能相互作用时，鉴定到的可能的蛋白激酶底物必须通过其他的体外或体内的方法进行确定。此筛选方法可以通用于鉴定多种蛋白激酶的可能底物的直接鉴定。

拟南芥和水稻基因组测序项目的完成极大地支持了蛋白质组学方法的应用，如蛋白质芯片技术。在本章中，我们介绍一种植物蛋白质芯片的构建方法及其在单克隆抗体或多克隆血清的特异性和交叉反应研究方面的应用。此方法从已鉴定的编码携带 His 标签的植物蛋白质的大肠杆菌（K cDNA 表达克隆开始，用高通量技术表达和纯化这些重组蛋白质后，用接触点样机构建蛋白芯片。用一种抗 RGS-His6 抗体来检测芯片上的这些重组蛋白质，为了分析特异性抗体，首先将芯片浸泡在各自的抗体溶液中孵育，接着在带荧光标记的第二抗体溶液中孵育。用芯片扫描仪检测信号。包含植物全蛋白质组的蛋白质芯片将是未来用以检测抗体的特异性和交叉反应的理想芯片格式。

已有一种方法可用来从 SDS-PAGE 凝胶中提取完整蛋白质并对其进行 MALDI-TOF MS 分析，以确定其分子质量。这种方法包括一个电洗脱步骤以及在 MALDI-TOF 质谱分析之前的一个低温基质/ 分析物共结晶步骤。首先用电洗脱方法( ProteoPLUS )从聚丙烯酰胺凝胶中提取蛋白质。电洗脱之后，在相同的电洗脱管中，透析去除盐、SDS 和染料。真空离心浓缩蛋白质。以牛血清白蛋白 （ BSA )和磷酸酶 B( Phos B )做标准蛋白，结果发现，电洗脱比被动洗脱能更有效地从凝胶中提取完整蛋白质。优化后的蛋白质回收效率分别为：BSA 89% 和 Phos B 58%。此结果支持了回收效率与蛋白质大小负相关的假设。传统使用甲醇和乙酸“ 固定胶”的方法被认为会显著降低蛋白质回收效率，如果可能应避免这么做。下一步包括全蛋白与 MALDI 基质(反 3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸，齐子酸，10 mg/ml) 低温共结晶的样品制备过程中也要进一步去除杂质。蛋白质和 MALDI 基质经混合、密封后贮存于 4℃ 过夜共结晶。然后除去上清液，再用相同的基质溶液溶解蛋白质-基质结晶。用低温共

环状 RNA（circular RNAs,circRNA）是一类具有闭合环状结构的 RNA 分子，早在 20 世纪八十年代即有研究报道，但由于其表达丰度低，文献报道较少，一直被认为是 RNA 转录剪切的罕见错误而被忽视。直到 2012 年开始有研究者开始大批量鉴定 circRNAs，从古生菌、线虫、小鼠和人类细胞鉴定出大量 circRNAs，揭示 circRNA 大量存在于真核转录组中，是细胞基因表达的一个普遍现象，并可能发挥重要的生物学作用。进一步研究表明 circR ...

高分辨率的蛋白质分离是蛋白质组学研究的一个重要条件，蛋白质的分离主要依赖于 2D IEF/SDS-PAGE，不幸的是，这种技术分离疏水性蛋白质的能力较差，而且不能用于研究自然状态的非变性蛋白质。蓝绿非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)表现出一种可替代 2D IEF/SDS-PAGE 的蛋白质分离方法，这种方法基于用阴离子染料考马斯亮蓝将负电荷整合到蛋白质或蛋白复合物上，进行天然状态下的蛋白质分析。结合 SDS-PAGE 电泳，第一相蓝绿胶上被分离的蛋白复合物在第二相 SDS-PAGE 凝胶上被分离成其蛋白质亚基组分，在 2D 凝胶上形成竖条的点。2D 蓝绿胶 SDS-PAGE 是蛋白质组学研究中 2D IEF/SDS-PAGE 的理想补充技术。

原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（Acrylamide简称Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（N，Nˊ-MethyleneBisacrylamide,简称Bis）,在催化剂核黄素或过硫酸铵和四甲基乙二胺的催化下，聚和而成的具有三维网状结构的胶。正常情况下蛋白的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。而在丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)，则蛋白的迁移率主要取决于蛋白大小，与所带电荷与形 ...

题记科研之路，一入侯门深似海，从此悠哉是路人~实验之殇，雄关漫道真如铁，怎么老是撞到铁今天，老蔡就陪各位铁兄铁姐啃一块难啃的铁块-如何实现动物体内的基因转染？所谓基因转染，通俗一点说，主要指基因上下调（即 Gain of function OR loss of function）。基因工程小鼠-经典的动物体内基因干预模型最经典传统的动物体内基因干预，当属基因工程小鼠了。基因工程小鼠包括转基因小鼠，（TG mouse,transgenetic mouse ...