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1. Wistar 大鼠血细胞计数

1. 昆明（KM）小鼠血细胞计数

提高酶稳定性是改造酶在高温等极端条件下行使其活性理想的设计步骤，同时也能降低酶对蛋白酶剪切的敏感性。由于这些优点，研究者已经发明了很多不同的方法和技术改造蛋白质，但到目前为止这些方法的效果很有限。这里，我们介绍包括末端截切、随机突变和断裂、重组、再延长，然后在生理温度下筛选，以期获得稳定性提高的酶活突变体。以 TEM-1β-内酰胺酶为模型蛋白，通过三轮酶的定向进化，包括随机突变、DNA 混编以及在 37℃ 下的筛选，得到了其体内氨苄抗性与野生型相当的有删截的突变体。动力学研究表明，筛选到的突变体与其野生型相比有显著的热稳定性。这种方法非常有效，进化所产生的酶能够在比野生型的最适温度高 20°C 的条件下，保持其最高的酶活反应。因此在生理温度下通过末端截切和接下来作为补偿的定向进化来干扰结构，是提高蛋白质热稳定性的快速、高效的方法，避免了在高温下筛选的需要。

ELISA 试验以灵敏度较高、特异性较好的特点得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我公司将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期提高试验质量。Elisa 试验操作中可能影响结果的原因及其相应的解决办法1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡至少 30 分钟。2 加样 可能原因：1）血清或血浆标本分离不好即进行 ...

蛋白质工程领域主要涉及关于设计新的酶活性或折叠，以及理解蛋白质正确折叠和稳定的最基本的序列决定因素。迄今，已有巨大的精力投入到设计构建多肽文库方法的研究中。最常用的方法是用来筛选具有高亲和力的特异性结合蛋白的噬菌体展示技术。本章讲述了一种可替代噬菌体展示的方法，该方法是基于二氢叶酸还原酶（DHFR)蛋白质片段互补检测（PCA)建立起来的，可以完全用于体内实验。我们以筛选 raf 蛋白的 ras 结合结构域（ras-binding domain，RBD)正确折叠且能于 ras 结合所需的简并序列为例，讲述 DHFR PCA 的应用。此筛选系统通过重复的竞争实验，富集文库中表现最好的序列，而无需将体外实验所必需的文库筛选和扩增步骤分离。而且，可以在 96 孔板中通过三乙酸基氮（ nitrilotriacetic acd，NiNTA)亲和层析直接快速处理被选中的克隆。此方法特别适用于设计和筛选研究序列折叠和结合决定因素的文库。另外，将该方法略加修改，还可以应用于文库间的筛选，从而可以使相互作用的蛋白质实现共同进化。

分隔式自我复制（CSR)是蛋白酶，特别是聚合酶，定向进化的一种新方法。在 CSR 最简单形式中，它包括一个简单的环路反馈，即聚合酶只复制编码自身的基因 (自我复制）。自我复制发生在一个热稳定的油包水乳化液形成的离散、分离、没有交互的空间中。分隔保证了表型和基因型之间的正确联系（也就是说，分隔保证了聚合酶只复制编码自身的基因而与空间外的成分没有关系）。这样，聚合酶特性的改进直接转化到编码该聚合酶的基因信息的扩增上。CSR 被证明在聚合酶的定向进化上是一个很有用的方法。在本章，我们描述了一些有用的 CSR 的实验方法，这些方法成功地利用一个 Tag 聚合酶随机突变库，使 Poll(Tag) 聚合酶性质得到了改变，如增加了热稳定性以及对潜在抑制剂（肝素）的抵抗能力。

标记免疫技术发展最早的一种是免疫荧光，它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，通过将抗体与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括，细胞固定和通透，封闭，孵育一抗，二抗等。除了这些基本步骤，接下来的实验方法希望可以帮到您。1. 细胞固定和通透为达到最佳的检测效果，细胞需要经过固定和通透。步骤很重要，细胞和抗原需要保证最佳的结构，并利于抗体与抗原结合。通常情 ...

在这里我们介绍一种在体外将基因型和表现型相联系的新策略，用来选择功能蛋白质。这个策略里，蓖麻蛋白的 A 链在翻译时被激活，因此不需要去掉终止密码子，就能形成核糖体、信使 mRNA 和翻译出蛋白质的稳定复合物。这个技术不需要转染、化学合成、连接，也不需要去掉终止密码子。因此，我们的新型核糖体失活展示系统能够为体外蛋白质的进化提供一个可靠的、简单的、完全的筛选系统，而不损失种群库，这样将随机和适度选择策略综合应用的方法，可以预测进化方向。

本章描述了改进融合蛋白在 M13 噬菌体颗粒表面展示水平的一个方法。向 M13 衣壳锚定蛋白引入突变后，蛋白质展示水平约能增加两个数量级。这里讲述改进蛋白质展示水平的噬菌体展示库的设计、构建以及筛选方法。

蛋白酶生化性质的改善可以通过对该酶基因的错掺突变和 DNA 混编方法实现。混编技术可用于同一基因的一组突变体，或者对相关家族基因的片段进行新的组合，产生嵌合突变基因产物。但该方法有一个缺点，就是在混编重组过程中，突变库中会存留大量并未发生重组的（“亲本”）片段。现在，我们可以通过设计简并引物，利用简并寡核苷酸基因改组方法来提髙发生重组基因的产量，减少未重组“亲本”基因的产量。在实验过程中，该方法既可避免混编前使用核酸内切酶将基因切成片段，又对基因特定片段进行随机突变。这里我们详细描述了这种方法如何应用于不同 GC 含量的 β-木聚糖酶家族基因。

摘要：泡罩包装是由塑料硬片与药用铝箔通过热封工艺形成的包装形式，泡罩包装的密封性能是一项极为重要的性能指标，对所包装药品的质量具有重要影响。本文利用济南兰光机电技术有限公司自主研发的 MFY-01 密封试验仪检测泡罩包装的密封性能，并介绍了设备的测试原理，叙述了试验的基本过程，从而为企业对泡罩包装密封性能的监控提供参考。关键词：泡罩包装、水泡包装、PTP 包装、医药、密封性能、密封试验仪、漏气、气泡1、意义随着药品包装形式的优 ...

医用手套能有效隔离医学污染，防止医患之间的交叉感染，已经成为了医院的必需物品。临床中，特别是有感染风险的手术中，医护人员最担心的就是手套破损或者穿孔，而恰恰手套破损是术中最常见的问题，尤其是涉及到骨科、整形的手术。导致手套破损或者穿孔的因素较多，比如器械损伤、骨性组织刺伤、手套强度下降导致的破裂等，较大面积的破损容易被发现，而如只有较小的穿孔则往往不易发现，交叉感染风险隐于无形。为此，有必要预先检测手套的耐穿刺性能 ...

摘要：药用输液袋大多采用聚烯烃、聚酰胺树脂原料共挤形成的复合膜作为包装材料，其具有极高的卫生安全性、无析出颗粒、高阻隔性、不易破裂等优点，但其密封性好坏是最影响药液质量、破坏无菌环境的性能指标。本文采用 Labthink 兰光自主研发的 MFY-01 密封试验仪检测输液袋的密封性能，并详述了该仪器的测试原理及试验详细过程，从而为制药企业等行业在对输液袋等包装密封性能的监控提供参考。关键词：输液袋、药品、药用、软塑包装、密封性能、密 ...

1. 不同的细胞，喜欢的环境是不一样的这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是 ...

利用 DNA 混编模仿自然进化过程是优化 DNA 和蛋白质性质的常用方法。这里我们介绍这类方法的一个新进展，即利用标准的聚合酶链反应（PCR)放大基因文库时与其他 4 种标准 dNTP—起掺入 dUTP 作为确定 DNA 碎裂位点的交换核苷酸。掺入的尿嘧啶碱基可用尿嘧啶-DNA-糖基化酶切除，随后 DNA 主链用哌啶切开。这个寡聚核苷酸库的重组装由内引物延伸步骤及高保真聚合酶来增加产率，最后由 PCR 扩增。变性聚丙烯酰胺尿素凝胶电泳表明这个方法可以产生大小可调的 DNA 片段，大小范围取决于 dUTP :dTTP 比率。对于一个模式蛋白，氯霉素乙酰转移酶I( CAT )，利用包含 33% dUTP 的 PCR 产生的混编基因库测序显示了大约 0.1% 的低突变率，并且，在没有进行片段分离的情况下，平均 亲本片段大小为 86 个碱基。因此，核苷酸交换和剪切技术（NExT) DNA 混编可重复性好并且容易实行，使之优于相应同类技术。另外，NExT 碎裂的结果可以利用计算机软件，NexTProg 预测出来。

设计具有很好折叠的大规模新型蛋白质库是最终能够产生具有工业及医学应用新结构及功能的蛋白质的有效途径。本章介绍一个极性/非极性氨基酸“二元组图”的蛋白质库设计方法，此方法整合了合理化设计和重组多样性。“二元组图”基于的前提是极性/非极性氨基酸残基的适当组合可以指导多肽链折叠成具有双亲性质的二级结构，此类二级结构可能“退火”形成所需的高级结构。设计的二元组图利用蛋白质二级结构中本身具有的周期性，使得每一个极性和非极性位点的侧链可以产生的组合变化。本章概述了如何利用二元组图法设计新型蛋白质库。

细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？原因：黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的， 还有就是血清和培养基。解决办法：1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能a、是「黑胶虫」，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或 ...

从培养的细胞和组织中提取总蛋白是实验室非常常见的实验步骤，从大多数类型的细胞和组织中提取总蛋白比较容易，但是从脂肪组织中提取高质量和高浓度蛋白质是非常困难的。脂肪组织有白色和棕色脂肪两种类型，被称为白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）。脂肪组织中含有许多脂滴，蛋白质含量小于细胞总数的 2%。低蛋白含量使得从脂肪中分离高浓度蛋白极具挑战性。以下是几种从脂肪组织中提取蛋白的方法：A.RIPA 缓冲液提取法：脂肪组织 ...

膜蛋白具有许多重要的细胞功能，对生物体存在至关重要。他们具有超过 60% 的药物靶点，占细胞总蛋白的 20%-30%。膜蛋白包括完整的膜蛋白，跨膜蛋白和外周膜蛋白。膜蛋白或者附着在脂质双分子层上或者通过疏水，离子或其他非共价与膜周边的完整蛋白结合。 使用表面活性剂进行质膜蛋白分离有可能破坏蛋白质-蛋白质相互作用，改变膜蛋白的拓扑结构。在一些下游应用中，例如膜蛋白 IP，Co-IP，酶检测，质谱分析实验，使用无表面活性剂的方法分离质膜蛋白 ...

在设计蛋白质库进行筛选时，在能够进行筛选的物理极限内我们必须尽一切可能产生出蛋白质变体的多样性。本章的目标是将概率的语言引入蛋白质工程实验中，进而来回答一些常见的问题。例如，我们怎样才能最有效地设计蛋白质库？我们最终从一个多样性完备的理论蛋白质库（简称理论库）中取样的比率是多少？错过理论库中一个个体的概率是多少？我们选择的变体中的突变是否具有统计意义，或仅仅是随机变异的产物？在整个蛋白质工程实验过程中这些计算标准可以使我们更好地设计和评价我们得出的蛋白质变体库。