全部

「亚细胞定位」已是高水平期刊对 lncRNA 研究的基本要求。一提到 lncRNA 定位，马上想到 FISH 的小伙伴肯定是学霸。今天推荐一个检索 LncRNA 亚细胞定位信息的专门网站。不卖关子，直接上链接，lncATLAS：http://lncatlas.crg.eu/。目前该网站已收集了经 GENCODE 注释的 6 700 余种 lncRNA，涵盖在人体 15 种细胞系中的定位信息。网站搜索很简单，刚一接触这个网站时，发现返回的图形化结果不好懂。我就 email 网站开发者，表达 ...

细胞划痕实验是一种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。 1 实验步骤实验材料：细胞样品实验仪器与耗材：6 孔板、marker 笔、直尺、枪头实验试剂：无血清培养基、PBS 2 实验操作准备：所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和 marker 笔在操作前紫外照射 30 min（超净台内）。先用 marker 笔在 6 孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔 0.5～1 cm 一道，横穿过孔。每孔至少穿过 5 条线。在空中加入约 5X105 个细胞，具体数 ...

①Cell杂志最受关注的五篇文章（4月）；②解开中枢神经系统自身免疫性炎症谜团 Nature子刊发现关键的表观遗传机制；③对于不明原因的肝病，外显子组测序显神威；④PNAS发现一种阻止肿瘤细胞免疫逃避的新生物标志物

酶联免疫吸附（ELISA）可以：免疫酶染色各种细胞内成份的定位研究抗酶抗体的合成显现微量的免疫沉淀反应定量检测体液中抗原或抗体成份 01实验方法原理双抗体夹心法（常用于测定抗原）双抗体夹心法测抗原示意图用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降 ...

所谓实时荧光定量 PCR 技术，是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 样品 RNA 的抽提步骤取冻存已裂解的细胞，室温放置 5 分钟使其完全溶解。两相分离 每 1 ml 的 TRIZOL 试剂裂解的样品中加入 0.2 ml 的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体 15 秒后，15 到 30 ℃ 孵育 2 到 3 分钟。4 ℃ 下 12 000 rpm 离心 15 分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA 全部被分配于水相中。水相上层的体积大 ...

最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室，CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复，其实际上就是一种基因编辑器，是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来，研究人员发现，它似乎是一种精确的万能基因武器，可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步：1. 确定待 ...

最近实验室的小师妹要开题了……师妹：课题还没有，预实验也没做，文献也没看，以前只顾玩了，肿么办？救命啊，师兄…… 呜呜……师兄：我能怎么办？怪我咯，不听师兄言，吃亏何止一点点（我默默地在心底得瑟了 3 秒，为什么是 3 秒呢？）。师兄：我的师妹啊，亲师妹啊！老板说的，你就跟着师兄吧。所以，师兄的内心是只可意会，不可言传……师兄：有没有感兴趣的方向？或者老板怎么说？师妹：呜呜…… 没有。老板说让我从头先做芯片表达差异分析。师兄有没有什么简单速成的可以应付开题？师 ...

常见的建树方法有：贝叶斯法（Bayesian），最大似然法（Maximum likelihood，ML），最大简约法（Maximum parsimony，MP），邻接法（Neighbor-Joining，NJ），最小进化法（Minimum Evolution，ME），类平均法（UPGMA）。一般来讲，如果模型合适，最大似然法的效果较好。对于近缘序列，最大简约法用的假设最少，各种方法结果相似。而对于远缘序列，一般使用最大似然法或邻接法。对相似 ...

手把手教你用 dyyTrizol 法提取 RNAYolander 生物学霸 2018-01-021准备1. 电泳：RNA 专用 0.5×TBE 缓冲液、DEPC 水2. 超净工作台：无 RNA 酶污染的枪头及 EP 管（1.5、0.2 ml）、镊子、1.5 ml EP 管架、离心管架、0.2 ml PCR 管架（200 μL 枪头盒代替）污物缸。一次性薄膜手套和橡胶手套、卫生纸、75% 乙醇、RNase Free 水、15 ml 离心管。2样品处理：RNA 提取前的步骤☞ 悬浮细胞每 1 ml Trizol 可裂解 5×106 动物、植物或酵母细胞，或 107 细胞。☞ 贴壁细胞1. 从培养箱 ...

最近很多人问毛老师关于磷酸化的问题。比如：要检测的蛋白有磷酸化的，要加磷酸酶抑制剂吗？在做 erk1/2 磷酸化表达实验，提取总蛋白的时候需要加入磷酸酶抑制剂，什么抑制剂比较好？答案是：当然必须一定要加啊！毛老师来给大家简单解释一下。许多生物学过程和通路的调节都伴随着磷酸酯的形成和去除。而蛋白的磷酸化状态的平衡是由蛋白激酶和磷酸酶相互影响达到的。其中一个重要的步骤就是准确的观察一般和特异的磷酸化状态。在细胞裂解的过程中 ...

1、 外泌体已成为生命科学/基础医学研究一大热点2018 年国自然基金评审结果已尘埃落定，其中医学科学部共计有 9830 项获得了基金委资助。从数据来看，热门的几个方向依然火热：外泌体、非编码 RNA、表观遗传、肠道菌群、m6A、CRISPR/Cas9 技术等，其中，涉及到外泌体的研究项目 401 项，总资助经费 1.7 亿元。哈尔滨医科大学李悦教授「外泌体 miRNAs 介导细胞间应答网络调控心房代谢重构在心房颤动中的作用与机制」获得了重点项目资助。外泌体中标项 ...

1. 基因组编辑技术应用于作物改良的基本原则1.1 ZFNs、TALENs 和 CRISPR/Cas 如何抉择ZFNs、TALENs 和 CRISPR/Cas 都是有效的基因组编辑技术，但三者在设计、特异性和效率上各有不同。ZFNs 由于特异性不高、脱靶问题严重及获得 ZFN 蛋白非常困难，严重阻碍了其广泛应用。TALENs 的优点是特异高、脱靶效应低，但载体构建较繁琐、编辑效率不是很高、且难以同时对多个基因进行编辑。CRISPR/Cas 系统的优点是编辑效率非常高 ...

基因组编辑技术是指可以在基因组水平上对 DNA 序列进行定点改造的遗传操作技术，其在基因功能研究和改造、生物医学和植物遗传改良等方面都具有重大的应用价值。科学家自 20 世纪 90 年代末就开始探索基因组定点编辑技术，但直到 2002 年，也仅在小鼠和果蝇等少数模式生物中实现了同源重组介导的基因组定点编辑，且因同源重组的效率很低，限制了其应用前景。进入 21 世纪后，随着蛋白质结构与功能研究的新突破和人工核酸内切酶 (engineeredendon ...

重组蛋白纯化基本原则蛋白的分离纯化是生物工程下游阶段一个比较重要的部分，尤其在基因工程重组蛋白的分离纯化中，上游过程的许多因素会直接影响到下游蛋白的分离，充分利用上游对下游的影响，对蛋白的纯化做一个全面的考虑和整体的设计。是否带有亲和标签，His标签，GST标签等，不同的亲和标签选择不同的纯化方案；可能是可溶性表达，可能形成包涵体，可溶性的蛋白往往需要复杂的纯化步骤，而包涵体易于分离，纯度较高，但回收具有生物活 ...

小鼠XX细胞药物干预后两种蛋白的磷酸化酪氨酸水平检测 实验分组：小鼠XX细胞，按下面分组进行药物干预培养，并收集细胞进行免疫沉淀实验。 1正常对照组2高糖组3高糖+E药物4高糖+A药物(25μM)5高糖+A药物(50μM)6高糖+A药物(100μM)7高糖+A药物(100μM)+B药物（1mM）8高糖+C药物(25μM)9高糖+C药物(50μM)10高糖+C药物(100μM)11高糖+C药物(100μM)+B药物（1mM）12高糖+D药物( ...

在生理状态下，许多细胞类型被流体环境包围。典型例子包括：血管内皮细胞，形成血管内层，淋巴管内皮细胞，形成淋巴管内层，肾和肺的上皮细胞。这种液体流动引起剪切应力，这是一种机械力，以多种方式影响细胞形态和行为。流体剪切力系统是一种通过在流体灌注的蓄液器内施加空气压力来产生液体流动的装置。该装置通过使用特殊切换模式来循环液体，产生恒定的单向流动。这使其成为在长期细胞培养中应用确定的剪切应力的理想设置。

做了 5 年的 MTT 实验 ，耗费了上万块 96 孔板。有成功的喜悦，有失败的沮丧，有好多话要对各位实验同仁说。在这之前，我们先回顾一下 MTT 的原理及操作步骤。实验原理MTT 是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素 C 的作用下，生成蓝色的 formazan 结晶。formazan 结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将 MTT 还原，无法形成结晶），且该结晶溶解于 DMSO。利用酶标仪测定波长 490 nm 处的光密度 OD ...

相信很多人一听到引物二聚体的时候都会很愤怒，因为几乎我们每个人都受到过它的折磨。它作为 PCR 的副产物，甚至有时候是主要产物充斥着我们的整个 PCR 实验过程。你在被它折磨的不行不行的时候，你有想过它为什么总是出现在你的实验结果中吗？接下来就让我带大家走进它的世界，了解它，认识它，最后战胜它。01引物二聚体是什么鬼？引物二聚体其实就是一对引物或者引物自身的 3’ 端部分碱基互补结合，在 Taq 酶的作用下从 3’ 末端延伸所形成的小分子量的双链 DNA 片 ...

今天组会后师妹很不开心，因为老板看了她的 western blot 的结果图后一脸严肃的说：你这个差异不明显啊。师妹说怎么就差异不明显了，我觉得挺明显的啊，她凑近电脑屏幕看了看后，又后仰身体拉大了距离进行观察，就差拿尺子来测量条带的长宽了。我被我这可爱的师妹给萌化了，但又不忍心看她愁眉苦脸的样子，于是轻抚摸师妹的秀发，深情的说到：妹妹，给你安利一款软件，轻松搞定 WB 结果表达差异。好了，下面就奉上使用 Gel-Pro Analyzer 对 WB 结果 ...

超 6,800 品系基因敲除小鼠，300 品系活体小鼠，引用文献 2,030 篇，IF 累计 9,750 分，被引用 17,757 次，单篇 IF 高达 40.137。赛业生物建设的「CRISPR-AI 敲除小鼠资源库」，库存已升级至 6,800 品系，涵盖 90% 热点基因，其中 87% 的品系是根据最新的研究热点研发的独有品系。更有超 300 品系活体小鼠，100% 保证基因敲除，最快 2 周交付，仅需 1.28 万 / 对，点此马上选购活动时间：2018 年 11 月 1 日——12 月 31 日活动对象：全国科研终端客户基因敲除小鼠优势：周期更短：最快两周交付；价格更 ...