全部

尾静脉注射，小鼠固定后可用 40-45℃ 热水孵育鼠尾 1 分钟左右，使血液流畅。

腿部肌肉注射通常不需要麻醉动物，但对拿取动物的姿势、手法等要求很高，务必留意小鼠或者大鼠会咬伤手指，我们以大鼠为例讲解腿部肌肉注射方法。

肾盂是肾脏的一部分，是圆锥形的囊状物，上连肾实质，下端通输尿管。如果对肾盂局部「快速」注射病毒，可以造成肾盏内压力过高，病毒会逆流而上，从而流入并感染肾脏实质。

通过手术手法将 AAV 病毒稀释液注射进入小鼠乳腺皮下组织。

鞘内注射是一种简便快速、无创式向脊索导入 AAV 的一种方法。

注射完成后保持针在血管内多留 10-15 秒防止回流病毒，然后拔掉针头，用手轻轻用力按压片刻。

由于血脑屏障（BBB）的存在，外周血内的很多物质无法有效进入到中枢神经系统（CNS），为了有效对 CNS 系统进行基因操作，可借助脑立体定位仪器直接对动物特定脑区进行直接的病毒操作。

相较于尾静脉注射，肝门静脉注射具有减少病毒注射体积（比如 30-50μL），增加肝脏特异性感染等优点。

腹腔注射时，待针头到达皮下后，继续向前进针 3mm-5mm，再以 45 度刺入腹肌。

本视频示意利用 AAV 携带绿色荧光蛋白 GFP 感染小鼠的眼睛。

提前一天接种细胞，一般保证第二天进行病毒感染时细胞汇合度介于 50% 至 70% 之间。

注：Polybrene 可提供病毒感染效率，但仅适用于对该试剂无明显毒性反应的细胞，如不加 Polybrene 可直接跳过该步骤。

细胞房使用前 30min 开机净化，病毒操作需带双层手套及双层口罩，做好消毒后开始后续操作。

m6A 是目前已知的真核细胞 mRNA 上最为常见的一类化学修饰，它的建立、读取和擦除分别受到相应甲基化酶（writer）、结合蛋白（reader）以及去甲基化酶（eraser）的动态可逆调控。研究表明，m6A 能够通过调节 mRNA 的剪接、出核、稳定性以及翻译等生命周期活动，参与调控机体的诸多生理或病理进程，包括胚胎发育、肿瘤以及神经退行性疾病的发生等。然而，在生理性衰老过程中，m6A 对于器官稳态维持的调控作用以及关键分子机制均有待阐明。2023 年 4 月 6 日，中国科学院动物研究所刘光慧研究组、曲静研究组联合中国科学院北京基因组研究所慈维敏研究组以及张维绮研究组在Nature Aging杂志在线发表了题为m6A epitranscriptomic regulation of tissue homeostasis during primate aging的研究论文。该研究利用非人灵长类动物（食蟹猴）生理性衰老的多器官研究模型，同时结合基于基因编辑和人类干细胞定向分化的研究体系，通过系统绘制器官和细胞衰老过程中 RNA m6A 修饰的动态图谱，解析了 RNA 甲基化修饰及相关基

长久以来，剪接体的调控机理是怎样的，它们在细胞内部的动态组合和变化是怎样的，深深地吸引着科学家们的研究兴趣，但其神秘的面纱一直未被揭开。2023 年 4 月 6 日，西湖大学施一公团队在Molecular Cell杂志发表研究论文Structural basis of pre-tRNA intron removal by human tRNA splicing endonuclease，该研究首次解析了人类 tRNA 剪接内切核酸酶（TSEN）在催化前和催化后状态下与全长 tRNA 前体 (pre-tRNA) 结合的低温电子显微镜结构，显示了 TSEN 如何识别 pre-tRNA，并将 3' 剪接位点和 5' 剪接位点定位到其切割位点，综合利用结构生物学和生化工作解释了人类 TSEN 去除 pre-tRNA 内含子的分子机制。图 1：来源Molecular Cell研究内容转运 RNA（tRNA）对生物遗传信息的传递至关重要，它通过核糖体将信使 RNA（mRNA）翻译成蛋白质。成熟的 tRNAs 由前体 tRNAs（pre-tRNAs）通过一系列的转录后加工和修饰步骤产生，从 pre-

燃烧多余卡路里，保持健康身材的生活理念正在被现代人广泛接受并付诸实践。对于爱美人士而言，「有效」和「安全」是其特别关注的点，既要有效地甩掉脂肪，也要保障减肥时身体机能维持平衡的状态。间歇性禁食是一种进食和禁食交替进行的饮食方式，越来越多的证据表明，间歇性禁食可以有效预防多种疾病，包括糖尿病、癌症和神经退行性疾病。此外，间歇性禁食也是减少热量摄取、减轻体重、改善代谢的可行策略，因此成为不少爱美人士的减肥首选。间歇性禁食有着多种不同方案，常见的有 16：8 断食法（16 小时禁食，8 小时进食）、12:12 断食法，甚至还有更极端的 23：1 断食法。虽然间歇性禁食有益于健康，但每次禁食的最佳持续时间仍然是一个悬而未决的问题。近日，湖南师范大学李国林团队在Cell Reports杂志发表研究论文Circadian transcriptional pathway atlas highlights a proteasome switch in intermittent fasting，该研究发现禁食 16 小时是一个关键节点，能够启动肝脏中 43 条经典通路的节律性共振和激活蛋白酶体。并确定肝

研究背景Angelman 综合征是一种神经遗传性疾病，患者通常会出现智力障碍、运动障碍和语言障碍等症状。该疾病又被称为「天使综合症」、「快乐木偶综合征」，因为临床表现为智力低下及全面的发育延迟，小头畸形、多动，存在运动障碍，常有频繁无诱因的暴发性笑或微笑、表情愉悦、拍手等行为。美国食品和药物管理局（FDA）于去年授予 Ionis 公司的 ION582 用于治疗 Angelman 综合征的孤儿药和儿科罕见病资格认定。但是目前尚未有能治愈 Angelman 综合征的上市药物。Angelman 综合征是由于母系基因组中 UBE3A 基因的缺陷或功能突变导致的，而父系基因组中的 UBE3A 基因则被非编码 RNA UBE3A-AS 转录本所抑制。UBE3A-AS 转录本是一个非编码 RNA，会抑制父系基因组中 UBE3A 基因表达。因此可以通过针对 UBE3A-AS 的转录起始区域进行干预，以恢复父亲基因组中 UBE3A 基因的表达。在这篇题目为：An ASO therapy for Angelman syndrome that targets an evolutionarily conser

如果需要同时纯化多个蛋白样品，且样品体积小时，可以用小离心柱来操作。如视频中所示，这种小离心柱中通常装填了相应的纯化树脂，实验操作起来简便快捷，通常兼容 1.5 ml 或 2.0 ml EP管。尤其可以使用多个小柱子来同时对不同的蛋白质进行批量纯化。本次视频演示了使用IBA的即用型离心柱空柱套裝，搭配Strep-tag蛋白纯化填料纯化目的蛋白的实验操作。

导读极端低温是有害的，但适度降低体温却对机体有益。事实上，降低体温已被证实可以延长两种变温动物（秀丽隐杆线虫、黑腹果蝇）和恒温动物（啮齿动物）的寿命。例如，秀丽隐杆线虫从标准温度转移到较温暖的温度时，寿命较短，而暴露在低温（15°C）时，寿命则显著延长。体温和寿命之间的相关性在人类中也有报道。更加有趣的是，自工业革命以来，人体体温每十年下降约 0.03°C，这与过去 160 年来人类寿命的逐渐延长存在潜在联系。尽管低温对寿命的影响早在一个多世纪前就有报道，但人们对低温如何影响寿命和健康知之甚少。2023 年 4 月 3 日，来自德国科隆大学的研究人员在Nature Aging上发表了题为Cold temperature extends longevity and prevents disease-related protein aggregation through PA28γ-induced proteasomes的文章。在这项研究中，报道了一种机制，或能解释适度低温为何能延长寿命，并减少年龄相关性蛋白质功能失调。研究显示，在秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans

本周学术君继续带来 CNS 最新进展，助力大家勇攀科研高峰！1.Cell Research：揭示猴痘病毒 DNA 复制机制去年，猴痘疫情被世卫组织宣布为突发公共卫生事件。2023 年 3 月 27 日，武汉大学药学院董长江/张郑宇团队在Cell Research杂志发表研究论文Cryo-EM structures of human monkeypox viral replication complexes with and without DNA duplex。该研究通过冷冻电镜解析了猴痘病毒（MPXV）聚合酶全酶和 DNA 结合状态的聚合酶全酶的高分辨率三维结构，揭示了病毒复制机制的 DNA 合成、校对和碱基切除修复的活性位点，为开发抗猴痘药物提供了结构基础。图 1：来源Cell Research2.Nature：张锋团队开发全新蛋白质递送系统递送是基因编辑的主要瓶颈之一，使脑部或者肾脏疾病无法得到有效治疗。2023 年 3 月 30 日，麻省理工学院博德研究所和哈佛大学张锋团队在Nature杂志发表研究论文Programmable protein delivery with a b