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        用PCR检测白血病时T细胞受体β链基因重排

        互联网

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        1. 引物设计:

        已知基因重排分二步进行,其结果为:

        ①D/J重排:Dβ1和Jβ6 Jβ7之间重排,产生D―N―J融合片段,N为随机寡核苷酸;

        ②V/D重排:Vβ和Dβ1―N―Jβ6―Jβ7之间再重排,产生V―N’―D―N―J重排片段。

        对于D/J重排引物设计于Dβ1和Jβ2互补片段,对于V/D重排则设计一条与Vβ片段互补,另一条与Jβ2片段互补的引物。

        2. PCR扩增:

        ①在100μl PCR反应液中含1μg DNA引物对各30pmol,4×dNTP 200μmol/L,Tris-HCl 10mmol/L(pH8.0),KCl 50mmol/L,MgCl2 3.0mmol/L,明胶0.001%;

        ②预变性:93℃,7min,55℃,2min,加Taq DNA酶1U;

        ③PCR扩增:93℃×1min,55℃×1min,72℃×1min 共30个循环最后一个循环时在73℃延伸10min。

        3. 产物分析

        经扩增后的寡核苷酸约55~96bp,两套引物扩增结果相同,这是因为V引物在V片段3’端,而D引物在片段5’端,两者相距不远。可以用PCR直接测序,也可用PAGE分析单克隆性重排。

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