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        Cell Lysates For Western Blotting

        互联网

        1099

         

        <center> <h1> Cell Lysates For Western Blotting</h1> </center>

        Reagents / Solutions

        Lysis Buffer:
        10ml 10% Sodium dodecyl sulphate (SDS)
        10ml Glycerol
        10ml b-mercaptoethanol
        8ml 0.5M Tris pH6.8
        1ml 0.1% bromophenol blue
        51ml H2 O

        Protocol

        1. Spin down 106 cells and wash, if required, in phosphate buffered saline.
        2. Resuspend cells in 100µl warmed lysis buffer, vortex then boil for 5 - 10 minutes to break up DNA.
        3. Cool (not on ice - the SDS will precipitate) and centrifuge to collect droplets.
        4. Vortex briefly to mix.
        5. The samples may now be analysed by SDS - PAGE and Western Blotting , or
        6. Store samples at -20°C until required.

         

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