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        快速分离单个核细胞方法总结

        三一造血技术有限公司

        638
        【实验操作步骤】
        1 使用移液管(枪)吸取15ml淋巴细胞分离液注到50ml分离管下室(15ml分离管吸取4ml);
        注意:请用移液管直接将淋巴细胞分离液通过隔板小孔注到分离管下室,勿将分离液置于分离管上室,否则分离液难以流至下室,影响后续分离操作。
        250ml分离管中加入2-30ml稀释血液样品(15ml分离管倒入0.5-8ml);
        注意:
        1)请勿将稀释血液样品注入到隔板下室;
        2)请将稀释血液从隔板上方缓缓加入,所加入的位置勿距离隔板太远,否则容易在管壁上残留血液样本。                       
        31200g条件下离心10分钟;
        注意:可延长离心的时间,去除更多的粒细胞,从而获得纯度更高的PBMC
        4离心后,管内样品从上往下分层如下:血浆-白膜层-分离液-隔层-分离液-红细胞沉淀;
        5直接将隔板上层液体快速倾倒入另一无菌离心管中(有少许红细胞贴于隔层上方为正常现象,因其离心后贴壁不会随上层液体倾倒出来)
        注意:倾倒隔板上层液体时需迅速,且一次性完成,勿反复倾倒。通常白膜层距离下方隔板尚有一段距离,因此倾倒时也不必将全部上层液体全部倒尽。
        6加入PBS45mL15mL分离管则至12mL, 用移液管重悬清洗细胞,室温300g离心10分钟
        注意:此步骤可去除大部分PBMC中的血小板。
        7重复第6步一到两次,获得的单个核细胞可以冻存或进行下游分析和培养。
        注意:重复第6步的洗涤可去除更多的血小板,但过多次的洗涤会造成PBMC的损失。
        快速分离单个核细胞方法总结


         
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