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        酵母DNA的快速分离

        相关实验:酵母 DNA 的快速分离

        最新修订时间:

        原理

        根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取,并且可以用于转化 E. coli。

        材料与仪器

        步骤

        一、材料

        1. 缓冲液及溶液

        乙醇

        酚:氯仿(1:1, V/V)

        醋酸钠(3 mol/L, pH 5.2)

        STES 缓冲液(0.2 mol/L Tris-Cl (pH 7.6),0.5 mol/L NaCl,0.1% (m/V) SDS,0.01 mol/L EDTA,室温保存)

        TE ( pH 7.6)

        2. 专用设备

        酸洗过的玻璃珠(0.4 mm)

        3. 细胞和组织

        新鲜的琼脂平板培养的克隆或液体的过夜培养的酵母细胞

        二、方法

        1. 准备用于裂解的酵母细胞。

        (1) 平板培养的酵母克隆

        使用无菌的接种环将一个或几个大的、新鲜培养的克隆转移到加有 50 μl STES 缓冲液的微量离心管中。

        (2) 液体培养的酵母

        ① 将 1.5 ml 过夜培养的酵母细胞转移到微量离心管中。

        ② 用最大转速室温下离心 1 min, 收集沉淀下来的细胞。

        ③ 吸去培养介质,将细胞重悬于 50 μl STES 缓冲液中。

        2. 向酵母悬浊液中加入 50 μl 酸洗过的玻璃珠。每管加入 20 μl TE ( pH 7.6)。

        3. 加入 60 μl 酚: 氯仿。盖上盖子,振荡 1 min, 使有机相和水相充分混合。

        4. 用最大转速室温下离心 5 min。

        5. 将上层水相转移到一个新的离心管中。0℃ 下用乙醇沉淀 15 min。

        6. 用最大转速 4℃ 下离心 10 min, 收集核酸沉淀。

        7. 吸去上清,用 100 μl 水配制的 70% 乙醇洗涤沉淀。用最大转速室温下离心 1 min。

        8. 吸去上清。空气中干燥 DNA 沉淀 15 min。将沉淀溶于 40 μl TE(pH 7.6)。

        来源:丁香实验

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