用于胚胎干细胞中饲养层细胞的原代培养

实验材料

12.5d孕鼠、PBS、DMEM、血清、酒精、双抗、解剖器、培养箱、超净台

实验步骤

1.性成熟小鼠合笼（♀∶♂=2∶1）

2.每天观察小鼠，见阴道栓后确定为怀孕0.5d。

3.取12.5d孕鼠，断颈处死，在酒精中泡数秒消毒。控干酒精后置于一个无菌的培养皿中。

4.无菌条件下暴露子宫。每打开一层要换一套解剖器材（皮肤&腹膜）。

5.提起双角子宫，再用一套新的解剖器剪去多余的子宫膜，剥离出胚胎，PBS洗三次。剪去胚胎头部、四肢和腹部以及发育的内脏，只留下背部的中胚层（以成纤维细胞为主）。

6.将剩余胚胎尽量剪碎，小于1mm3，再用PBS洗三次，尽量弃去红细胞。

7.在组织块中加入血清（含双抗），然后转移到方瓶中。

8.在方瓶底部将大约25个组织块铺在瓶底，将方瓶倒置放入培养箱中，让组织块靠血清的作用粘附于瓶底，3h后，将方瓶正常放置，并加入DMEM培养。

9.3天后，观察结果。