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        大鼠骨髓原代培养用于MSCs生产

        相关实验:大鼠 MSCs 的获得和扩增实验

        最新修订时间:

        原理


        材料与仪器

        步骤

        (a)从一根股骨所得的骨髓悬液中取出10μL,与l0μL台盼蓝混合。评估存活率,确保髙于80%。


        (b)1000 g离心10 min沉淀骨髓。


        (c)用25 ml预热的含抗真菌药物的CCM重悬骨髓(处理大鼠骨髓细胞使用抗真菌药物,人骨髓细胞不使用)。


        (d)将25 ml细胞悬液加人到15 cm直径的组织培养板中,37℃,5% CO2环境下至少孵育15 h。


        (e)从培养箱中取出培养板,吸出培养基。


        (f)用20 ml预热的PBSA润洗单层细胞。重复润洗过程3次,将最后的洗涤产物加人30 ml预热的含抗菌药物的新鲜CCM中(只有大鼠细胞使用抗真菌药物)。


        (g)如有需要每隔两天重复步骤(f)维持6〜14天。


        (h)每3天用倒置显微镜观察单层细胞。贴壁、成纤维细胞样的MSCs集落可以在培养板中清晰可见。某些情况下,这可能是造血细胞污染的信号,但这些细胞随着细胞传代过程可被去除。当培养物达到40%〜50%汇合时进行处理。这些MSCs标记为0代。

        来源:丁香实验

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