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        分光光度法检测RNA浓度

        互联网

        11685
        使用法玛西亚公司的DNA/RNA浓度测定仪,测定样品A260和A280值。根据A260/ A280比值,估测RNA质量。一般A260/ A280比值在1.8~2.0之间,可以满足实验要求。在100μl RNA原液中取1μl稀释至250μl(DEPC处理的水),测定样品的A260和A280的值,按下列公式计算其浓度:RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40(ng/μl)
        测定 RNA浓度按以下步骤进行操作:
        ⑴ 取1μl RNA原液,放在0.5ml EP管中,加入249μl dd H2O,用移液枪反复混匀。
        ⑵ 用dd H2O为空白对照,调节A260零点。
        ⑶ 倒掉比色杯中的水,加入稀释并混合均匀的RNA样液,测定A260值。倒掉比色杯中的RNA样液,用dd H2O冲洗比色杯,再调节A280零点。
        ⑷ 倒掉比色杯中的水,加入稀释并混合均匀的RNA样液,测定A280值。计算A260/ A280比值,比值≥1.8,满足实验要求。
        ⑸ RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40(ng/μl)

         

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