简介
角膜病是主要的致盲性眼病之一。炎症、外伤、变性、营养不良和肿瘤等均可导致角膜疾病的发生，其中感染性疾病最为多见，约 20% 的盲人是由眼部感染而失明的。造成角膜感染的病原微生物主要以细菌、病毒和真菌最为常见。
原理
单纯疱疹病毒性角膜炎（herpes simplex keratitis, HSK）是一种由单纯疱疹病毒（herpes simplex virus, HSV）感染所致的严重危害患者视功能的致盲性眼病。
其临床主要表现：病程长、反复发作，最终导致角膜白斑、角膜新生血管增生、角膜溃疡甚至穿孔等严重危害患者的视功能。
HSK 复发感染期的角膜病变则以基质型和内皮型结膜炎症为主，其主要临床表现为角膜基质浑浊、水肿、胶原纤维断裂、甚至角膜新生血管增生等。
用途
有关 HSK 的临床基础研究，目前主要通过建立 HSK 动物模型来进行。采用小鼠角膜划痕法和紫外线 B 光照射法可以成功地制作出原发感染期、潜伏感染期和复发感染期的 HSK 模型。此建模操作具有方法简单、方便可靠，成模率高等特点。
材料与仪器
实验对象：
小鼠。
实验器材：
PCR 仪、裂隙灯显微镜。
实验试剂：
① 丁卡因滴眼液。
② DMEM 培养液。
③ 荧光素钠。
步骤
HSK 复发感染小鼠模型的基本过程可分为如下几步：
A. 取接种病毒后 7 周并经角膜和三叉神经节样本 PCR 检测证实为 HSV 潜伏感染期的小鼠模型，用丁卡因滴眼液表面麻醉后，暴露在 302nm 紫外线下照射 3 分钟。紫外线透射仪功率为 1.4 MW/cm2，照射强度为 250MJ/cm2。
B. 紫外线 B 光照射后次日开始，连续 7 天，每天用 10 g/L 荧光素钠染色并在裂隙灯下观察角膜是否再次出现点状、树枝状或地图状病灶。
C. 用蘸有 DMEM 的棉拭子擦拭角膜后进行 HEK293T 细胞培养，观察细胞病理学改变（CPE），以判定模型小鼠角膜擦拭液中是否有 HSV 存在。
如果在紫外线 B 光照射后角膜再次出现点状、树枝状或地图状病灶，且角膜擦拭液培养出现 CPE 者，即确定为 HSK 复发期模型建立成功。
注意事项
所有 HSK 潜伏感染期模型小鼠经紫外线 B 光照射后，1 周内全部出现了以基质型角膜炎为主要临床表现的角膜病变。即原来光滑、透明的角膜再次出现不同程度的角膜基质层水肿和灶状角膜基质浑浊，部分模型鼠还可出现局部结膜新生血管增生。
同时，角膜擦拭液 HEK293T 细胞培养病毒检测呈阳性。
来源：丁香实验
