• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        Lowry检测法

        相关实验:Lowry 检测法测定蛋白质浓度实验

        最新修订时间:

        原理

        Lowry 法又称为 Folin-酚试剂法。首先在碱性溶液中形成铜-蛋白复合物,然后这一复合物还原磷钼酸-磷钨酸试剂 (Folin-酚上级),产生钼蓝和钨蓝复合物的深蓝色,这种深蓝色 的复合物在745~750 nm 处有最大的吸收峰,颜色的深浅(吸收值)与蛋白质浓度成正比,可根据 750nm 的光吸收值大小计算蛋白质的含量。

        材料与仪器

        步骤

        1. 溶液


        1.1 溶液 A,100 ml

        0.5 g CUSO4·5H2O

        1 g Na3C6H5O7(·2H2O)

        加双蒸水至 100 ml, 溶液可长期保存于室温。


        1.2 溶液 B,1L

        20 g Na2CO3

        4 g NaOH

        加双蒸水至 1 L, 溶液可长期保存于室温。


        1.3 溶液 C,51 ml

        Folin 溶液A

        50 ml 溶液B


        1.4 溶液 D,20 ml

        10 ml Folin-酚试剂

        10 ml 双蒸水


        2. 检测


        2.1 用双蒸水稀释样品至 0.5 ml;


        2.2 加 2.5 ml 溶液 C;


        2.3 混匀在室温下放置 5~10 min;


        2.4 加 0.25 ml 溶液 D, 混匀;


        2.5 20~30 min 后,在分光光度计上测 A750 值。


        3. 从干扰物质中纯化蛋白质样品的附加步骤

        脱氧胆酸-三氯醋酸(DOC-TCA)沉淀法。此法可在测定蛋白质的溶液浓度低于 1 ug/ml 情况下使用。

        所需试剂:0.15 % (w/V)DOC:72 % TCA


        3.1 于 1 ml 蛋白质样品中加入 0.1ml 0.15 % DOC;


        3.2 震荡后在室温放置 10 min;


        3.3 加入 0.1 ml 72 % TCA, 摇匀后,1000~3000×g 离心 5~30 min。如使用固定角转头,以及低温或大体积则需较长时间离心;


        3.4 倾斜,吸弃上清液;


        3.5 直接用溶液 C 溶解沉淀。

        注意事项

        1. 在加入试剂 20~30 min 后呈色达到饱和,此后每小时颜色信号减弱 1 %。


        2. 许多干扰物质降低颜色反应,而去垢剂引起颜色轻微升高。


        3. 高浓度盐可引起沉淀。


        4. 氯仿抽提可去除溶液中的脂质,在 K 或 Triton X-100 存在时可通过离心去除混浊物。


        5. 去垢剂,蔗糖和 EDTA 的干扰可通过在 Lowry 试剂中加入 SDS 来消除。


        6. —般情况下,蛋白质-染料复合物的消光系数 ≤ 1.2。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序