染色体制片操作流程

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1、取对数生长期细胞一个T75或T25瓶。

2、将培养基换成10ml DMEM (H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培养基，处理1~2小时。

3、将细胞培养 液倒掉，马上加入3~4ml 0.1%胰蛋白酶，并立即摇晃0.5~1min。当在显微镜下看到分裂相细胞脱壁后，马上加入终止液终止消化，并将分裂相细胞收集在一个15ml的离心管中，并在1200r/min离心4min。

4、将上清液倒掉，剩余50ul左右的液在管中，并轻微震动，使细胞沉淀重新悬浮。

5、加入10ml的低渗液(0.075M KCL)，第一毫升要逐滴加入，并边加边摇晃。

6、37℃水浴中低渗30min。

7、再加入1ml冰冷的固定液(甲醇：乙酸=3：1 的混合液)，并马上摇匀，离心，1000r/min、10min。

8、同步骤4。

9、加入10ml冰冷的固定液，第一毫升要逐滴加入，边加边摇晃。

10、室温下固定30min，然后离心，1000r/min、10min。

11、同步骤4。

12、加入10ml冰冷的固定液，第一毫升要逐滴加入，边加边摇晃。

13、室温下固定15min，然后离心，1000r/min、10min。

14、重复步骤11~13一次。

15、将离心后的上清液倒掉，并加入50~100ul的新鲜固定液重悬细胞。

16、滴片(玻片要求是湿冷的干净的，滴片高度要大于30cm。玻片倾斜角度15~30度左右)

17、镜检。