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        梨离体叶片再生实验

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        1215

        实验材料

         

        金花和丰产两种梨树的离体叶片。

        实验步骤

         

        1. 培养基的配制

         试验所用的培养基为MS (Murashige & Skoog, 1962), NN69 (Chu et al ., 1975), C (Pinet-Leblay et al ., 1992), LE (Quoirin & Lepoivre, 1977)等,均为固体(有特殊说明者除外)。各种培养基均参照参考文献记述的方法配制。

         

        2. 无菌苗体系的建立

         取经过休眠的枝条,用自来水冲洗干净表面尘土,置于25±2℃的培养室内水培催芽。萌发后,将枝条剪成单芽茎段,用添加吐温-20的自来水冲洗30min。然后在超净工作台上用70%的酒精灭菌15s,再用0.1%的升汞溶液灭菌8-10min,最后用无菌水冲洗4-5遍。切取刚萌发的芽接种于MS BA1mg/L IBA0.2mg/L启动培养基上,待芽长成约1cm左右的新梢时切下转移到增殖培养基培养,所保存的材料每4周在相同的培养基上继代1次。灭菌前把所有培养基的pH值用1M的HCl或NaOH调节为5.6,然后在121℃、131Kpa的条件下灭菌20min。培养温度为25±1℃,光照强度2500Lx,光照16h、黑暗8h。

         

        3. 离体叶片再生

         从转移生长20d左右的无菌苗顶部,摘取刚展开幼嫩叶片,用无菌刀垂直于叶片中脉横切伤,使叶片产生多个伤口,然后把叶片接种在不同的诱导培养基上。分析基本培养基对再生的影响。所有培养基中均含0.6%琼脂,3%蔗糖(蔗糖浓度试验除外)。接种后先黑暗处理,然后转移到光下培养,黑暗处理分4个水平(0、10、15、20d)。培养条件同上。

         

        4. 再生植株的增殖、生根和移栽

        将不定芽剪切成0.5-1cm的茎段,接种到MS附加不同激素种类及浓度的增殖培养基上,进行增殖培养。将大于1cm的新梢转接到不同的生根培养基上诱导生根。

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