DNA回收纯化及重组体的构建

互联网2013-09-06

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相关基础知识

1.DNA 片段的纯化：

DNA 纯化的主要目的是回收得到纯的目的 DNA 片段，去除影响 DNA 连接酶活性的物质以及其它的 DNA 片段。纯化 DNA 片段的方法有多种，如：电洗脱法、从低熔点或普通琼脂糖凝胶中回收、玻璃珠纯化、柱层析以及硅胶吸附等方法。目前一些生物公司推出了直接从 PCR 产物中或琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段的试剂盒，有效地加快了 DNA 的纯化的速度。

2.DNA 重组

DNA 重组本质上是一个酶促生化过程，是指将外源目的基因片段通过 DNA 连接酶的的作用插入到质粒载体中的过程。 DNA 片段只有与载体重组并转入合适的宿主细胞中才能进行复制。通过此方法可以对单个基因的功能进行研究。结合 PCR 技术还可以应用于疾病诊断、合成具有商业意义的产品，如胰岛素、干扰素等。

3.载体的选择

因为载体具有能够在特定宿主细胞中独立自我复制的复制起始点，保证插入的外源片段的复制；并且具有多个限制性内切酶的单一位点，即多克隆位点，用于插入外源片段，而又不破坏质粒本身的结构；还具有易于筛选和检测的标记性基因，如抗药性基因、酶基因或营养缺陷型等。但针对不同的研究目，选择的择载体也是不同的，不仅要考虑上述特性，而且还要考虑所选载体是表达载体还是非表达载体、是真核生物表达载体还是原核生物表达载体以及酶切位点等方面的问题。