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        细胞生长检测2:MTT检测法

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        2159

         

        MTT 检测法

         

        1. 96 孔细胞培养板,每孔中加 0.1ml 2 × 104 10 × 104 靶细胞的培养液(含 10 %小牛血清的 RPMI-1640 培养液),在 37 5 CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 2 3 小时让细胞帖壁(如果是悬浮细胞可直接进行下一步)

        2. RPMI-1640 培养液 2 10 倍递次稀释细胞因子标准品,根据情况 2 5 倍递次稀释待检样品,每孔加 0.1ml 稀释的标准品和待检样品,每个稀释度 3 个重复孔。对照孔 6 个: 3 个阳性对照孔,每孔加 0.1ml 含大剂量细胞因子的 RPMI-1640 培养液, 3 个阴性对照孔,每孔加 0.1ml RPMI-1640 培养液。在 37 5 CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 24 48 小时或预定的时间。

        3. 吸去培养液,用 PBS 洗涤一次(如为悬浮细胞,应在吸去上清液前离心培养板)。

        4. 每孔加 0.1ml PBS 10 μ l MTT 染液,在 37 5 CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 4 6 小时。

        5. 每孔加 0.1ml 酸化异丙醇,也可用含 10 SDS 10mmol/L HCl 代替酸化异丙醇,在振荡器上振荡混匀,让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度( OD )值,检测波长 570nm ,参考波长 630nm 。以 OD 值对样品稀释度作图,比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。

         

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