实验室常用仪器分光光度计

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不同物质对不同波长入射的吸收程度各不相同，从而形成各具特征的吸收光谱 。根据这一原理，应用比色法可以对某些有色物质进行定性或定量分析。但由于比色法仅限于可见光区，而且精度低，已远远不能满足高精度微量分析的要求。随着科学技术不断发展，分析仪器 也不断地更新换代，人们引进了分光光度法的概念，分光光度计随之应用。分光光度计由光源、单色器、吸收池、接受器、显示屏幕所组成，它不仅适应于可见光区，同时还扩展至紫外光区及红外光区。光密度(OD)是许多溶液中的溶质定量的指标之一，通过所产生的单色光而测定某一溶液对该单色光的吸收值。分子生物学实验中常使用紫外分光光度计进行核酸溶液定量和纯度的初步判断。下面介绍紫外可见光分光光度计GeneQantTM Pro(Amersham)的使用方法。该仪器除了能检测核酸样品浓度外，还可进行蛋白质浓度以及细胞培养液浓度的测定，能检测低至几微升样品(70µl和5～7µl)，样品无需稀释，测量后还可全部回收。

使用方法

(1)打开电源开关(ON)，等待数秒钟，显示屏上显示一系列数据，如本机型号、当前日期等，这些数据可以重新设置，当出现“instrument Ready”即可进入下一程序。

(2)在仪器面板上有许多功能键，其中包括检测base sep 、Tm、DNA 、RNA、oligo、Protein595assay、Protein280 meas、cell culture等。例如，欲检测DNA， 按DNA键，即进入DNA检测程序。在显示屏上：

Pathlengh 10mm

Units µg/µl

Use 320nm NO

Dilution Faotor 1

Insert reference,

以上为仪器预设置的参考数据，若按“enter”键，和“select”键可以将以上的参数进行重新设定。

(3)取石英样品杯70µl或5～7µl ，容量大小根据需要。先用吸管吸高纯水入样品杯中，然后放入仪器上的样品槽中，放入时注意样品杯的光学面朝前方。

(4)按“set ref”键，进行空白测试。显示屏上出现一系列数据均“0.000”并提示插入样品“Insert sample ”。将样品杯取出，吸干水分，稍干燥后，同样吸入待测样品，放入样品槽中进行测定。

(5)一个样品测定完毕，按“stop”键，返回“Instrument Ready”。

(6)取出样品杯，吸出样品，然后用高纯水洗几次，自然晾干。由于样品杯十分昂贵，使用时要小心操作。不能用手指拿样品杯的光学面，用后要及时洗涤，可用温水或稀盐酸，乙醇以至铬酸洗液(浓酸中浸泡不要超过15分钟)，表面只能用柔软的绒布或拭镜头纸擦净。