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        小麦未成熟胚愈伤组织的诱导

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        一、 实验目的

        掌握无菌操作方法,将小麦未成熟胚培养成为愈伤组织。

        二、 实验原理

        植物 体的任何一个细胞都具有全能性。分化了的植物根、茎、叶等组织在一定的条件下进行离体培养,给于一定的营养和激素,可以脱分化为愈伤组织。愈伤组织在不同的营养和激素的作用下,又可以生出完整的小植株。植物的脱分化和分化培养,证明分化了的植物细胞仍具备形成完整植株所需要的全套基因。

        三、 培养基的制备

        1.母液的配制:
        大量元素(10倍的母液)

        小麦未成熟胚愈伤组织的诱导

        铁盐
        有机成分
        甘氨酸
        激素

        2.培养基的配制:
        取各种成分后,加入3%蔗糖和0.6%琼脂 ,加热溶化,用1NHCL或1N NaOH调PH至5.8。
        3.分装:25-30瓶/升
        1.灭菌:15磅,20分钟
        一、 实验步骤
        1.取材:小麦受粉后10-15天,小麦长大至半仁,颖壳稍胀开,此时未成熟胚颜色发白。
        2.整穗:剪去芒,70%酒精消毒。
        3.剥粒:剥取带颖壳的麦粒15-20粒。
        4.消毒:用纱布包裹麦粒置0.1%升汞中消毒10分钟。
        5.接种:
        (1)用蘸有70%酒精的棉球消毒手及超净台。
        (2)把一切用具(包括镊子、解剖针、解剖刀等)放于70%酒精中消毒,并在酒精灯上烧,待冷却后使用。
        (3)取一瓶培养基,除去皮筋,将锡箔纸取也放在超净台上。
        (4) 将消毒后的麦粒用无菌水冲洗3次,置于无菌的滤纸上。
        (5)剥取未成熟胚,将其接种在培养基上,每瓶接种10个左右即可。
        6.培养:25℃,培养15天。
        7.观察:
        第一周观察:所取的胚过于成熟,则胚芽鞘已形成,所诱导的愈伤组织易出芽;若胚太嫩,则生长缓慢,愈伤组织成堆生长。
        第二周观察:外周透明部分为衰老细胞,不具分生能力,容易褐化死亡。其特点是细胞呈不规则形,胞质空,核占很小的比例。中央有一定硬度、组织较致密的小白点,为生长点,由分生细胞组成,分生能力很强。其特点是圆形、内含物丰富,核占的比例较大,可见到正在分裂的细胞。
        制片步骤:
        固定(卡诺固定液固定5-10分钟)→酸解(1N HCL)→水洗→染色(改良苯酚品红染色3-5分钟)→压片→镜检
        评分标准:
        操作基础分为4分;第一周未污染为5分;第二周未污染为6分;找到衰老细胞和分生细胞各加1分;找到前、中、后、末四个时期加2分。

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