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        细胞分离中如何降低污染 专家有妙招

        互联网

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        Stemcell公司是一家致力于开发生命科学领域细胞培养 基、细胞分离和相应试剂的生物技术企业,所开发的上千产品已销往全球70多个国家和地区。在血小板的细胞分离上,Stemcell的专家经验丰富,向我们分享了不少操作心得:

        血小板与红细胞、白细胞并称三大血细胞,有凝血作用。血小板是由骨髓中成熟的巨核细胞裂解,胞质脱落而形成的,每个巨核细胞可产生2000~7000个血小板。血小板很粘稠,而且特别喜欢与单核细胞黏在一起。

        StemCell 的大部分阴性选择试剂盒都包含了一个细胞表面标志物,能选择性去除血小板。然而,单核细胞富集试剂盒及其他少数试剂盒不能靶定血小板,然后将其清除,因为那样会去除单核细胞或其他想要的细胞类型。因此,在分离单核细胞时,我们就必须采取措施来降低血小板污染。

        在制备单核细胞悬液时,Stemcell给出了如下的建议:

        1. 从Ficoll密度梯度离心中取出单核细胞层时,避免吸到富含血小板的血浆。

        2. 缓慢离心,洗涤单核细胞(120×g,10分钟,常温)。

        3. 小心弃上清,其中含有血小板,用新鲜的缓冲液重悬细胞(记得换个干净的吸头)。

        4. 重复上面2步,总共洗涤3次。

        另外,Stemcell还给出了一些降低血小板污染的其他建议:

        • 使用大口径的针来抽取血液样本

        • 轻轻地抽血,如果使用注射器推杆,不要大力牵引

        • 抽血时使用更多的抗凝血剂,比如,增加肝素、EDTA 或ACD的量

        • 使用不含钙镁的缓冲液进行洗涤和细胞分离

        • 在细胞分离缓冲液中使用更高水平的EDTA(2或3 mM)

        • 确保轻柔操作,不要震荡

        Stemcell公司的产品包括:检测造血干细胞功能的半固体培养基MethoCult®和 MyeloCult®系列,培养和鉴定间充质干细胞的MesenCult®系列,培养和分析神经干细胞的NeuroCult®系列,培养胚胎干细胞和多能干细胞的Es-Cult®系列产品,可以分选各种细胞的免疫磁性分选系统EasySep®,全自动细胞分选仪RoboSep®,全自动克隆挑选系统 EasyPick®,及与其配套使用的ClonaCell®-HY试剂等等。

        血小板是三大血细胞之一,在培养过程中由于黏性很大,还有容易污染,在培养中是一类不好对付的细胞。Stemcell认为,在制备血小板细胞悬液时,要使用大口径的针抽取样品,动作轻柔。

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