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        还原法制备胶体金的五种方法

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        胶体金制备方法简单,产用还原法制备胶体金。常采用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。本文总结了五种制备胶体金颗粒的常用的方法,具体如下:

        1、枸橼酸三钠还原法

        (1)10nm胶体金粒的制备:取0.01%HAuCl4水溶液100ml,加入1%枸橼酸三钠水溶液3ml,加热煮沸30min,冷却至4℃,溶液呈红色。

        (2)15nm胶体金颗粒的制备:取0.01%HAuCl4水溶液100ml,加入1%枸橼酸三钠水溶液2ml,加热煮沸15min~30min,直至颜色变红。冷却后加入0.1Mol/LK2CO30.5ml,混匀即可。

        (3)15nm、18nm~20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备:取0.01%HAuCl4水溶液100ml,加热煮沸。根据需要迅速加入1%枸橼酸三钠水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml,继续煮沸约5min,出现橙红色。这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、18~20nm、30nm和50nm.

        2、鞣酸-枸橼酸钠还原法

        A液:1%HAuCl4水溶液1ml加入79ml双馏水中混匀。

        B液:1%枸橼酸三钠4ml,1%鞣酸0.7ml,0.1Mol/LK2CO3液0.2ml,混合,加入双馏水至20ml.

        将A液、B液分别加热至60℃,在电磁搅拌下迅速将B液加入A液中,溶液变蓝,继续加热搅拌至溶液变成亮红色。此法制得的金颗粒的直径为5nm.如需要制备其它直径的金颗粒,则按表15-1所列的数字调整鞣酸及K2CO3的用量。

        表1鞣酸-枸橼酸钠还原法试剂配制表

        金粒直径
        (nm)
        A液 B液
        1%HAuCl4 双馏水 1%枸橼酸三钠 0.1Mol/L
        K2CO3
        1%鞣酸 双馏水
        5 1 79 4 0.20 0.70 15.10
        10 1 79 4 0.025 0.10 15.875
        15 1 79 4 0.0025 0.01 15.9875

        3、柠檬酸三钠还原法制备金溶胶

        取0、01%氯金酸水溶液100ml加热至沸,搅动下准确加入1%柠檬酸三钠水溶液0.7ml,金黄色的氯金酸水溶液在2分钟内变为紫红色,继续煮沸15分钟,冷却后以蒸馏水恢复到原体积,如此制备的金溶胶其可见光区最高吸收峰在535nm,A1cm/535=1.12。金溶胶的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关,一旦颗粒大小发生变化,光散射也随之发生变异,产生肉眼可见的显著的颜色变化,这就是金溶胶用于免疫 沉淀或称免疫凝集试验的基础。

        金溶胶颗粒的直径和制备时加入的柠檬酸三钠量是密切相关的,保持其他条件恒定,仅改变加入的柠檬酸三钠量,可制得不同颜色的金溶胶,也就是不同粒径的金溶胶,见附表。

        附表100ml氯金酸中柠檬酸三钠的加入量对金溶胶粒径的影响

        1%柠檬酸三钠ml0.300.450.701.001.502.00

        金溶胶颜色蓝灰紫灰紫红红橙红橙

        吸收峰(nm)220240535525522518

        径粒(nm)14797.571.54124.515

        4、柠檬酸三钠-鞣酸混合还原剂

        用此混合还原剂可以得到比较满意的金溶胶,操作方法如下:取4ml1%柠檬酸三钠(Na3C6H5O7.2H2O),加入0~5ml1%鞣酸,0~5ml25mmo/LK2CO3(体积与鞣酸加入量相等),以双蒸馏水补至溶液最终体积为20ml,加热至60℃取1ml1%的HAuCl4,加于79ml双蒸馏水中,水浴加热至60℃,然后迅速将上述柠檬酸-鞣酸溶液加入,于此温度下保持一定时间,待溶液颜色变成深红色(约需0.5~1小时)后,将溶液加热至沸腾,保持沸腾5分钟即可。改变鞣酸的加入量,制得的胶体颗粒大小不同。

        5、白磷还原法

        在120ml双蒸馏水中加入1.5ml1%氯金酸和1.4ml0.1mol/LK2CO3,然后加入1ml五分之一饱和度的白磷乙醚溶液,混匀后室温放置15分钟,在回流下煮沸直至红褐色转变为红色。此法制得的胶体金直径约6nm,并有很好的均匀度,但白磷和乙醚均易燃易爆,一般实验室不宜采用。

        要得到大小更均匀的胶体金颗粒,可采用甘油或蔗糖密度梯度离心,经分级后制得胶体金颗粒直径的变异系数(CV)可小于15%。

        制备胶体金所使用的还原剂不同,胶体金颗粒大小会有所不同。免疫 胶体金技术以其独特点的优点,在生物医学等领域广泛应用。

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