十分感谢！！
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对了，Na3VO4是Na3PO4吗，NaF是氟化钠吗。
还有，怎么蛋白定量（是用考马斯亮兰染色吗？）并鉴定是核蛋白
多谢！
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请教yfyu1963 ：
我在稀释标记探针时遇到一个问题：我买的是单链标记的探针，需自己退火，可我不知上下游退火后，探针的浓度如何计算？例如：
上下游各为4.9nmol/OD
1. 上游：1OD 稀释成1ml，终浓度：4.9μmol/L
下游：1OD 稀释成1ml, 终浓度：4.9μmol/L
2. 取上下游各100μl，混合，退火，退火后双链探针的浓度是4.9μmol/L还是2.45μmol/L？
谢谢！
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healinghands200 wrote:
对了，Na3VO4是Na3PO4吗，NaF是氟化钠吗。
还有，怎么蛋白定量（是用考马斯亮兰染色吗？）并鉴定是核蛋白
多谢！
钒酸钠。考马斯亮兰染色行啊。据我所知只能跑电泳了，见上贴。
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adzcat wrote:
请教yfyu1963 ：
我在稀释标记探针时遇到一个问题：我买的是单链标记的探针，需自己退火，可我不知上下游退火后，探针的浓度如何计算？例如：
上下游各为4.9nmol/OD
1. 上游：1OD 稀释成1ml，终浓度：4.9μmol/L
下游：1OD 稀释成1ml, 终浓度：4.9μmol/L
2. 取上下游各100μl，混合，退火，退火后双链探针的浓度是4.9μmol/L还是2.45μmol/L？
谢谢！
4。9：）
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请问yfyu1963 ：
你提的蛋白浓度是多少
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1-5ug/ul
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请教yfyu1963 几个的问题
1. 带正电荷的尼龙膜有正反面吗？
2.探针能反复冻融吗？还有EMSA试剂盒中-20度保存的东西，做一次岂不就要冻融一次，会影响吗？
3. 我的凝胶是8cm×7.3cm×0.1cm的，用100V电压电泳，发现电泳速度极快，约35MIN溴酚蓝即泳至距底部1/4处，不知此电压合适不合适？
4. 每次加样都必须按说明书上的顺序吗？
非常感谢您的热心回答。
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adzcat wrote:
请教yfyu1963 几个的问题
1. 带正电荷的尼龙膜有正反面吗？
2.探针能反复冻融吗？还有EMSA试剂盒中-20度保存的东西，做一次岂不就要冻融一次，会影响吗？
3. 我的凝胶是8cm×7.3cm×0.1cm的，用100V电压电泳，发现电泳速度极快，约35MIN溴酚蓝即泳至距底部1/4处，不知此电压合适不合适？
4. 每次加样都必须按说明书上的顺序吗？
非常感谢您的热心回答。
1有的，正面标记一下
2可以啊，但肯定不大好不过没办法，你可以分装探针。盒子里那些东西我看都是不怕的，（PIERCE）
3没问题。
4没有，共有部分可以先加在一起再分，
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我做的时候，没有转染转录因子的对照也有shift的band，不知道有什麽办法解决
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你是怎么判断它是shift band?川图上来看啦
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yfyu1963您好：我是一名新手，准备作EMSA，看了您上传的图片，非常想当面向您请教学习一下该技术的相关经验，如果可以考虑的话，冒昧的请您把联系方式发到我的邮箱里：xixi76120@163.com
万分感谢！！
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xixi76120 wrote:
yfyu1963您好：我是一名新手，准备作EMSA，看了您上传的图片，非常想当面向您请教学习一下该技术的相关经验，如果可以考虑的话，冒昧的请您把联系方式发到我的邮箱里：xixi76120@163.com
万分感谢！！
呵呵，感觉象对个前辈似的，不必，我也没有太多经验的不敢当，你还是先试试做，然后有什么问题贴上来大家一起讨论我看会更好。
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yfyu1963 :
我目前准备做EMSA，检测猪的转录因子NFKB，E2F，我不想用同位素检测方法，听说化学发光法效果不错，我想请教一下：1 两者在实验操作中步骤有何大的区别么？2 化学发光法用特殊的远红外检测仪么？3 上述两种转录因子能用一个试剂盒作么？4 检测猪的转录因子与鼠和人的主要困难在哪里？需要注意点什么东东呢？
问题多了点，谢谢
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xixi76120 wrote:
yfyu1963 :
我目前准备做EMSA，检测猪的转录因子NFKB，E2F，我不想用同位素检测方法，听说化学发光法效果不错，我想请教一下：1 两者在实验操作中步骤有何大的区别么？2 化学发光法用特殊的远红外检测仪么？3 上述两种转录因子能用一个试剂盒作么？4 检测猪的转录因子与鼠和人的主要困难在哪里？需要注意点什么东东呢？
问题多了点，谢谢
1. 主要在最后一步的显影上不同，同位素的靠其放射性显影，化学发光用化学原理。但同位素要求实验条件：专门的屋子。 (责任编辑：大汉昆仑王)
