抗子宫内膜抗体(endomethal antibody，EMAb)检测

 

    1．试剂  ①子宫内膜抗原：从子宫切除术取得的子宫内剖取内膜，用无菌生理盐水洗去血块，剪成lmm3小块，悬入0．01mol／L，pH7．4PBS中(内含青霉素1 000U／mL，庆大霉素50ug／mL，链霉素100ug／mL，10％小牛血清)与0．25％胶原酶(collagenase Type 1)共育，通过250um,40um不锈钢分样筛，洗去胶原酶，收集筛网上子宫内膜腺体，经玻璃匀浆器匀浆后，1 000r／min离心20rain，弃沉淀，上清通过抗人全血清-Sepharose 4B柱，收集流洗液。浓缩后，双向免疫扩散与抗人全血清、抗人纤维蛋白原抗体之间应无沉淀线，作为包被抗原；②HRP标记的SPA结合物，用方阵法滴定最适工作浓度。

 

    2．操作步骤  在聚苯乙烯反应板每孔加100uL子宫内膜抗原(1：100)，4T：，包被过夜，常法洗涤。用含15％小牛血清的pH7．40．01mol／LPBS封闭，45℃温育1h，洗涤后加1：2稀释的待测血清，45℃1h后洗涤，加底物(OPD-H₂ 0₂ )溶液，于37％避光反应5～15min，加H₂ S0₄ 终止反应后，测492nm波长吸光度(A)值。以A值的X十2S为正常上限，大于或等于上限者为阳性。

 

    3．临床意义  正常妇女由于经血逆流人腹腔对免疫系统的刺激，血清中有低水平EMAb存在(阳性率3％—7％)，以中年妇女的阳性率最高，闭经后EMAb水平下降，渐趋消失。不孕、流产及子宫内膜异位症患者阳性率可达37％～50％。EMAb、抗精子抗体和弓形体感染是引起人类不孕、流产的3个主要因素，联合检测则更可以提高诊断的准确性。