经内镜直接检测幽门螺杆菌的基础与临床研究

 

经内镜直接检测幽门螺杆菌的基础与临床研究

　　自1983年Warren和Marshall报告，从胃炎患者胃粘膜分离幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）以来，越来越多的资料表明，Hp与 慢性胃炎 ，消化性溃疡关系密切，历此，为了有效的防治Hp相关 慢性胃炎 、消化性溃疡等疾病，需要一种快速、准确而直观的检测Hp手段。目前，检测Hp手段较多，包括：切片法、涂片法、刷检法、培养法、尿素酶法、 ¹³ C呼气试验法及抗体检法等。这些方法归纳起来，有以下缺点：①需取材标―费事；②标本需要处理―费时间；③作者的新鲜胃切除标本实验表明，Hp在胃内的分布并非均匀，如局部取样检测，不可避免的出现假阴性。那么，能否将胃内的Hp检测直观化呢？就此问题，我们进行基础及临床的探讨。

1　基础研究

1.1　原　理

　　幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰阴性螺旋状短杆菌，具有强的尿素酶科活性，将尿素分解成氨和二氧化碳，氨属碱性，提高胃内pH值，使含有酚红的 试剂 由桔黄色变成粉红色或红色。

1.2　试剂的研制

确定一定浓度的Hp分解尿素，改变pH值，使试剂颜色改变的尿素和酚红的浓度。方法是将一定浓度的幽门螺杆菌，即5×10CFU/ML分别加入不同浓度尿素和酚红溶液中，观察其颜色变化（表1）。

实验结果表明，一定浓度的Hp分解尿素，改变pH值，使试剂颜色改变的尿素和酚红的最适宜浓度分别为0.5mol/L及0.025％

表1　不同浓度素与酚红溶液中Hp的颜色

尿素浓度（mol/L）

酚浓度（％）

颜色变化

0.1

0.005

－

0.2

0.010

－

0.3

0.015

－

0.4

0.020

－

0.45

0.025

＋

1.3　Hp分解尿素的适宜pH

　　我们配成上述试剂后喷洒于胃粘膜，发现除极个别病例胃粘膜着粉红色或红色，绝大多数病例并不着色，这是什么原因呢?后来发现Hp菌体所含的尿素酶，分解尿素的最适宜pH值为5～8，而 慢性胃炎 ，尤其是消化性溃疡病人的pH值多在1～3，我们认为使Hp分解尿素，必须改胃内的pH值，根据胃酸泵抑制剂奥美拉唑和胃H ₂ 受体阻滞剂Famotidine20mg或检查前1h静脉注射Famotidine 20mg，检测慢性胃炎，消化性溃疡共30例，用pH检测慢性胃炎，消化性溃疡共30例，用pH检测导管从胃镜活检孔插入检测胃pH值，结果pH值为5.0～5.5，2例；5.6～6.0，15例；6.1～6.5，8例；6.6～7.0，5例。

以上结果表明，检查前1a晚上服奥美拉唑20mg，或检查前1h静脉注射famotidine 20mg，胃pH值达到5.0～7.0。

2　临床研究

2.1　对象与方法

　　本组175例均经GIF―100型电子胃镜诊断，其中慢性胃炎100例， 胃溃疡 25例，十二指肠溃疡50例。检查前1d晚上口服奥美拉唑20mg。插入胃镜后先将胃液抽空，胃窦、胃角及胃体各取1块活检做切片，吉姆萨染色、检测Hp，以作与喷洒法相对照。然后经塑料管注入我消化实验室研制的试剂喷洒于胃窦、胃角、胃体及溃疡周围，观察颜色变化，胃粘膜被染成粉红色或红色为阳性。

3　结果　见表2，表3。

表2　试剂喷洒与切片法相对照结果

方　　法

慢性胃炎
（n：100）

胃溃疡
（n：25）

十二指肠溃疡
（n：50）

切片法Hp阳性率(％)

50.0

72.0

80.0

试剂喷洒Hp阳性率(％)

68.0

80.0

90.0

表3　慢性胃炎、 胃溃疡 、十二指溃疡的染类型（％）

试剂反应

n

弥慢性着色

局灶性着色

散在性着色

不着色

慢性胃炎

100

57(57.0)

2(2.0)

9(9.0)

32(32.0)

胃溃疡

25

13(52.0)

5(20.0)

2(8.0)

5(20.0)

十二指溃疡

50

34(68.0)

4(8.0)

7(14.0)

5(100.0)

4　讨论

　　目前，检测Hp的方法较多，包括切片法、涂片法、刷检法、培养法、尿素酶法、 ¹³ C呼气试验法及抗体检测法等。这些检查均需一定的时间，1988年作者研制的快速Hp检测试剂，只需几秒至1min以内即可检测Hp，但其缺点是取胃粘膜活检的局限性可能出现假阴性。本方法是Hp菌体内含有丰富的尿素酶―分解尿素―改变pH（偏碱性）―试剂由桔黄色变为粉红色或红色的原理设计。伊藤报告Hp尿素酶活性的适宜pH值为5.0左右。我们从临床试验验证，病人在受检前一天晚上，服胃酸泵抑制剂奥美拉唑20mg或胃组织胺H ₂ 受体阻滞剂famotidine 20mg静脉注射60min后，胃pH值达到5～7。

作者采用新鲜胃切除标本反复检测Hp结果表明，Hp在胃粘