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        各种组织特殊染色法—基底膜的显示

        互联网

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        (一)基底膜的结构
        基底膜一般是由纤维的结缔组织,粘多糖和蛋白质所构成,电镜可分为三层,即中间层(电子密度较高的致密层)内层和外层(电子密度较低疏松层)。基底膜内主要含有IV形 胶原蛋白 ,蛋白多糖和层粘连蛋白,这些物质的存在,给显示基底膜提供了物质基础。
        (二)显色的方法
        1.六胺银法(Hexamine silver)
        Jones六胺银染色法的改良法[5]
        I. 试剂 的配制:
        A液:3%乌铬托品(hexamine)
        B液:5%硝酸银
        C液:5%四硼酸钠(Sodium tetraborate)
        II.工作液的配制:
        取A液12.5ml,加入B液2.5ml,混合在一起,此时可出现乳白色,搅拌片剂,即可消失,再加入2.5ml的C液,再加入12.5ml的蒸馏水,即可使用。
        操作方法:
        ①切片脱蜡至水。
        ②1%的过碘酸氧化切片10min。
        ③自来水洗,继入蒸馏水洗。
        ④入工作液于60℃60~90min,于50℃120~180min
        ⑤蒸馏水洗。
        ⑥用0.2%的氯化金水溶液调色1min。
        ⑦自来水洗,蒸馏水洗。
        ⑧5%硫代硫酸钠固定5min。
        ⑨自来水流1~2min.
        ⑩用1%淡绿复染30secd。
        ⑾脱水,透明,封固。
        结果:基底膜呈出深黑色,背景呈现绿色。
        2.AFOG法
        试剂 的配制:取苯胺蓝(aniline blue)0.5克溶于100ml的 蒸馏 水中,煮沸后冷却,再加入桔黄G1克,酸性品红1.5克,用HCC校正pH至1.9,即可使用。
        ①切片脱蜡至水
        ②AFOG液染色5min
        ③自来水洗,95%脱水多采染色
        ④脱水,透明,封固。
        结果:基底膜,胶原纤维显示不同程度的蓝色,红白球及背景呈桔黄色,管型蛋白呈鲜红色。
        (三)该法的主要特点:
        在一张切片上既可看到深黑色的基底膜和鲜红色的沉淀蛋白,又可看到蓝色的结缔组织,给予某些疾病的诊断和鉴别带来了方便。
        (四)临床应用:
        ① 可以观察各种疾病的进展和损害程度。
        ② 对膜性肾病可显示增厚的基底膜。
        ③ 可以观察某些肿瘤突破基底膜的情况。
        ④ 可以对某些疾病作出预后的判断。
        ⑤可用于卡氏肺囊虫肺炎的诊断。
        (五)注意事项
        ① 如应用于基底膜的染色,应在切片脱蜡后用苦味酸进行媒染。
        ② 切片浸染时间从染液达60℃算起。
        ③浸染应以基底膜染色合适为标准。
        ④浸染液一次性使用。
        ⑤ 所用的常备液应于4℃冰箱中存放。
        ⑥ 一切器皿须清洁液浸泡。
        在六胺银液中的浸染,可用微波加热法。在银液中的浸染时间为1分钟左右。
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