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        应用EL-4 CTLL检测IL-1生物学活性

        互联网

        2057

          ㈠ 原理:小鼠胸腺瘤细胞系EL4的某些亚克隆细胞表面具有高密度IL-1受体,在IL-1诱导下产生高水平的IL-2,通过用IL-2依赖株CTLL-2检测IL-2的生物学活性,从而反映检测样品中IL-1的水平。
          ㈡ 操作步骤:  免疫学实验技术论坛   http://bbs.bbioo.com/forum-140-1.html
            1. 用EL4细胞两步法检测IL-1活性:
                收集处于对数生长期的EL4细胞
                       ↓
               洗涤后,用1%FCS RPMI1640重悬细胞,并
                   调整细胞浓度2×106/ml,
                        ↓
                  加处96孔板中,100μl/孔
                        ↓
                加入不同稀释度的IL-1α或IL-1β,100μl/孔,
                   同时设1%FCS RPMI 1640对照
                        ↓
                   5%CO,37℃培养18~24小时
                        ↓
                按终稀释度为1∶10~20转入另一块96孔板中
                        ↓
               用CTLL-2 检测IL-2活性、检测方法见"IL-2检测"

        2. 用EL4细胞一步法检测IL-1活性
                用5%FCS RPMI 1640调整
                EL4细胞浓度至2×105/ml,CTTL-2浓度至4×105/ml
                           ↓
                    加入96孔板中,两种细胞各加50μl/孔
                           ↓
                    加入不同稀释度的IL-1或待测样品,同
                     时设EL4和CTLL-2细胞对照
                           ↓
                   置5%CO2,37℃培养24~28小时后加入
                3H-TdR,0.5μci/50μl/孔,继续培养6~8小时
                          ↓
        收集样品,β计数

          ㈢ 试剂 和器材
           1. EL4细胞
           2. CTLL-2细胞
           3. 标准rIL-1。
           4. 3H-TdR、POPOP、PPO、二甲苯。
           5. 玻璃纤维滤纸,细胞收集仪。
           6. β计数仪
           7. 96孔板,无菌吸管,滴管、 试管 及加样器头。
           8. FCS,RPMI 1640,CO2培养箱等。
          ㈣ 注意事项:
          1. 在一步法检测IL-1时,其EL4细胞浓度不宜超过1×104/孔, 血清 终浓度应<5%。
          2. 在二步法检测IL-1时,其EL4细胞浓度在2×105/孔时,犉d转移上清稀释度不宜低于1∶8,其诱导时间应12~24小时间为佳。诱导 血清 浓度应≤1%。
          3. 在检测经诱导的上清中IL-1时,应避免使用A23187,TPA和ConA等较强的能诱导EL4细胞产生IL-2的诱导剂来刺激IL-1的产生。

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