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        石蜡切片制备及H-E染色最全的实验步骤

        互联网

        3009
        一、准备工作
        (一)洗涤实验所需器皿:(玻璃器皿的清洗)
        1、  用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷
        2、  将器皿在自来水下冲洗干净
        3、  将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干
        注:一般情况下,经以上步骤后,用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用,如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时,再经自来水彻底冲洗,再用蒸馏水过洗1~3次 烘干备用。
        (二)配制: 硫酸洗液的配制
        清洁液(洗液)的配制:
             成分          强酸液   次强酸液   弱酸液
            浓硫酸(ml)    1000       200       100
           重铬酸钾(mg)    63       120       100
            蒸馏水 (ml)    200       200      1000
         
         
        重铬酸钾     1200g
        蒸馏水      2000ml
        将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中,边倒边用木棒轻轻搅拌
        (三)载玻片与盖玻片的处理
        1.        将所需载玻片与盖玻片清洗后,放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时
        2.        流水冲洗,再用蒸馏水冲洗3遍
        3.        95%~100%酒精浸泡24小时,用绸布擦干备用
        注:在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时,要一片片地投入,使其不致重叠。

        二、常用液体的配制
        (一)缓冲溶液:
        1.磷酸盐缓冲液
        A液:0.1mol/L磷酸二氢钠
        B液:0.1mol/L磷酸氢二钠
        A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(3:7≈PH7.0)
        2.枸椽酸缓冲溶液
        A液:0.1mol/L枸椽酸
        B液:0.1mol/L枸椽酸钠
        A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(6.2:42.8≈PH6.2)
        (二)固定剂:
        1.甲醛:10%甲醛
        福尔马林    100ml
        蒸馏水      900ml
        注:实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。
        2.10%中性福尔马林钙固定液
        甲醛液    10ml
        蒸馏水    90ml
        加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后,放置24小时取上清液使用。
        3.4%多聚甲醛:
        8%多聚甲醛
        多聚甲醛   8g
        蒸馏水    100ml
        加温至60℃左右,不时搅拌,成为乳白色溶液。滴加1N NaOH,并不停搅动至液体清明。
        1N NaOH
        lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量
        氧化钠(NaOH );分子量=40.005,当量价=1
        1N Na0H的配制方法为:m=40.005/1=40.005g。取40.005gNaOH溶解于1L蒸馏水中
        4%多聚甲醛
        8%多聚甲醛         50ml
        0.1M磷酸盐缓冲液   50ml
        PH7.2
        先取50 ml 8%多聚甲醛,用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.2
        4.Bouin液:
        苦味酸饱和水溶液       75ml
        36%~40%福尔马林液    25ml
        冰醋酸                 5m1
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