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        动物细胞融合技术

        互联网

        12259
        1 动物细胞融合方法 :

        1.1 病毒诱导融合
              灭活的仙台病毒可诱发细胞融合成多核体细胞。
                一般过程:

        1.2  化学诱导融合
        方法:类似植物细胞融合的PEG法。
        特点:来源方便、使用简便、活性稳定、融合效率高
             由于动物细胞pH值多为中性至弱碱性,PEG溶液的pH值应调至7.4~8.0为宜。
         
        1.3  电激诱导融合
        方法:类似植物原生质体电激融合。
        优点:操作简单;适用于各种细胞类型; 不需加外源因子如PEG等;对细胞的毒性相对低;融合率很高;可用于细胞数量很少的融合过程;可在显微镜直视下定向诱导细胞融合以及直接挑选杂交细胞。

        1.4 微流控制细胞配对和融合技术 (Microfluidic control of cell pairing and fusion)(Nature Method,2009)
         
        2 融合细胞的筛选
             与植物杂合细胞筛选的模式类似。
                  同型合胞体(同核体):其中含有两个或多个相同细胞核
          合胞体 í
                  异型合胞体(异核体):含有两个或多个不同的细胞核。
         
        杂种细胞:少数异型合胞体细胞核融合,染色体合并到一个细胞核内。
                亲本体细胞来自同一物种——两套染色体彼此相容不发生排斥
        融合细胞 í
                  亲本体细胞来自不同物种——产生排斥现象(其中一套优先排斥)
                
        2.1 基于酶缺陷型细胞和药物抗性等所建立的杂种筛选(HAT等)
        2.2 基于营养缺陷型细胞等所建立的杂种筛选
        2.3 基于温度敏感突变型细胞组成的杂种筛选
        2.4 利用荧光激活分选技术进行筛选
         
        3 融合细胞克隆化
                利用单个 细胞培养 的技术选育出遗传稳定的、能表达特定性状的细胞系。
        3.1、有限稀释法
        3.2、半固体培养基法
        3.3、显微操作法
            克隆化后的细胞,经过有限的扩增以后立刻就要冻存种子细胞.
         
        鉴定 细胞克隆,筛选具有所需性状的杂种细胞
         
        杂交细胞的遗传表型:多样性;不稳定性
         
        4 细胞融合技术的 主要 应用 :
               l) 染色体的基因定位 ;
               2) 遗传疾病的治疗与基因互补分析;
               3) 特殊活性物质的制备——淋巴细胞杂交瘤技术。
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