pH对酶活力的影响——最适pH的测定
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酸性磷酸酯酶动力学性质分析
实验（二） pH对酶活力的影响——最适pH的测定
[原理]
pH对酶活力的影响极为显著。酶表现其最高活性时所处的pH即酶的最适pH，因为通常各种酶只在一定pH范围内才表现它的活力；一种酶在不同pH条件下所表现出来的活性不同。
pH之所以对酶活性有很大影响，很可能是因为它改变了酶活性部位有关基团的解离状态。在最适pH时，酶分子上活性基团的解离状态，最适于酶与底物的结合；而高于或低于最适pH时，酶活性部位基团解离状态不利于酶与底物的结合，酶活力也相应降低。pH也可影响底物的解离及反应系统中其它组分的解离。缓冲系统的离子性质和离子强度，也可能对酶反应产生影响。另外，pH除了对酶活性有很大影响外，对酶的稳定性也有很大影响。过高过低的pH会改变酶的活性中心的构象，或甚至改变整个酶分子的结构使其变性失活。
本实验测定pH对酸性磷酸酯酶活性的影响并测定最适pH。
[方法和步骤]
取11支试管0～10编号，0号为空白。各管加入0.1mL 25mmol/L磷酸苯二钠水溶液。从l号管至10号管依次加入不同pH的缓冲液0.4mL，摇匀。于35℃恒温水浴预热2min。各管记时加入稀释好的酶液0.5mL，充分摇匀，精确反应15min后，加入1mol/L碳酸钠溶液2mL，再加入0.5mL Folin-酚稀溶液，继续保温显色10min。空白管所加 试剂 相同，但酶液最后加入。取出冷却后，以0号管作空白，置 分光光度计 中在680nm波长处读取各管的吸光度A 680 值。
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管号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
undefined |
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反应pH |
2 |
3 |
3.5 |
4 |
4.5 |
5 |
5.5 |
6 |
6.2 |
7 |
5.5 |
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25mmol/L磷酸苯二钠 |
各0.1mL |
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相应pH缓冲液 |
各0.4mL |
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35℃预热2min |
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稀释酶液 |
各0.5mL |
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35℃精确反应15min |
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1mol/L碳酸钠溶液 |
各2.0mL |
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Folin-酚稀溶液 |
各0.5mL |
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35℃保温显色10min |
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A 680 |
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注：0号管反应pH为5.5，酶液最后加入。
[数据处理]
以反应pH为横坐标，A 680 （代表初速度）为纵坐标，绘制pH～酶活力曲线，求出酸性磷酸单 酯酶 在本实验条件下的最适pH。
