氨基酸纸层析法原理和操作步骤

相关知识
1. 层析法（色谱法）：是一种物理的分离方法。它是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两个相中，其中一个相为固定的（称为固定相），另一个相则流此固定相（称为流动相）并使各组分以不同速度移动，从而达分离。
2．几种常用的层析法
①吸附层析　②离子交换层析　　③薄层层析　 ④凝胶层析（凝胶过滤）　⑤亲和层析
⑥分配层析（适于在水，有机溶剂中都可溶的混合物）
当把一种物质在两种不混溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀的分配。达到平衡时，这种物质在两种溶剂中的浓度之比是一个常数，即分配系数。



如果某一混全物的各组分在这两相中的分配系数有足够的差异，它们就可以被分离。
　3．氨基酸的极性大小及各氨基酸结构
一、实验目的
１．通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法
２．掌握氨基酸纸上层析法的操作技术（点样、平衡、展层、显色、鉴定）
二、实验原理
纸层析法是分配层析的一种，以滤纸作为惰性支持物。层析溶剂（扩展剂）由有机溶剂和水组成。
在纸上水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相移动而进入无溶质的区域，这时又重新进行分配，一部分溶质从有机相进入水相。当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断进行分配。溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的。


 
在一定的条件下某种物质的R _f 值是常数。R _f 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、 _P H层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。氨基酸、糖、核甘酸、甾体激素、维生素、抗生素等很多物质都能用纸上层析法分离。上层层析、下层层析、单向层析、双向层析。
三、 仪器 、材料和试剂
仪器 ：每组学生准备尺子、小剪子或小刀
1．层析缸、培养皿、量筒、小烧杯、长颈漏斗、毛细管、吹风机、电热鼓风干燥箱、层析滤纸、手套 、透明胶带。
实验材料和 试剂
1．标准氨基酸溶液　分别配制0.5%的Lys、Ala、Ile、Met溶液
2．待分离测定的混合氨基酸溶液
３．显色剂　0.1%水合茚三酮丙酮溶液。
４．扩展剂（展层剂）：本实验使用酸溶剂系统
　酸溶剂系统：正丁醇:80%甲酸:水＝15:3:2（体积比），平衡溶剂与扩展剂相同。