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        HIV RNA定量测定(病毒载量测定)

        互联网

        5729

        1 范围
        本章规定了测定HIV病毒载量常用方法的实验室条件、方法、结果判定以及应用,适用于血浆中HIV病毒载量的测定。

        2 规范性引用文件
        Guidelines for the Use of Antiretroviral HIV-Infected Adults and Adolescents MMWR Recommendations and Reports April 24, 1998/47(RR-5); 42-82.
        Chiron® Product insert (Quantiplex® HIV-RNA), L6170 rev 5.0, June 1994 Roche AMPLICOR HIV MONITOR™ TEST Procedure Manual.
        Fractions of HIV-1 Seropositive Persons by Two Nucleic Acid Amplification Assays, AIDS. Research and Human Retrovirus 1993; (9):259-265.
        http://www.niaid.nih.gov/daids/vir_manual/full_vir_manual.pdf

        3 实验室条件
        3.1 实验室功能分区
        3.1.1 实验室原则上应分为4个独立工作区
        试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区,并设在不同房间。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区。各区的功能是:
        3.1.1.1 试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。
        3.1.1.2 样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。
        3.1.1.3 扩增区:核酸扩增。
        3.1.1.4 扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
        3.1.2 扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。
        3.1.3 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
        3.1.4 在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内:
        3.1.4.1 在生物安全柜内操作。
        3.1.4.2 每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。
        3.1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
        3.1.4.4 用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。推荐的程序是:
        (1)实验前将次氯酸钠溶液或70%乙醇涂布于操作台或器具表面,两分钟后用纸巾擦除。
        (2)移入盛放污染材料的器皿、所需的试剂、耗材和样品,进行试验。
        (3)一个实验区域在同一时间段只进行一种实验。
        (4)实验结束后,移出个人专用材料至个人专用区域保管;封好污染材料盛放器皿并移至污物袋;移出共享器具至专门区域保管;将次氯酸钠溶液或70%乙醇涂布于操作台或器具表面,两分钟后用纸巾擦除;打开紫外灯照射至少15min。
        3.1.5 各区域的 仪器 、设备、器具、工作服和试剂应为该区专用,不得交叉使用。
        3.2 人员
        进行HIV核酸检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格,并接受过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。
        3.3 设施和设备
        3.3.1 根据检测项目配备相应的设施和设备。
        3.3.2 各区域的设施和设备应为区域性专用,开展特定试验时应根据要求在相应区域放置专用设备。以下是各区域应配备的设备:
        3.3.2.1 试剂准备区:冰箱、洁净工作台、离心机、加样器、振荡器、废弃物容器。
        3.3.2.2 样品处理区:冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴、上下水设备、废弃物容器。
        3.3.2.3 扩增区:核酸扩增设备、冰箱、离心机、加样器、废弃物容器。

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