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        PCR-SSP HLA分型技术

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        PCR-SSP HLA 分型技术
         
        PCR-SSP(sequence specific primer)分型技术是根据编码各种HLA抗原的等位基因的碱基排列顺序,设计并合成与之互补的寡核苷酸作为PCR引物,样本中HLA等位基因能够用相应的引物(即SSP)进行扩增。通过控制PCR反应条件,SSO仅扩增与其互补结合的HLA等位基因,而不扩增其他的等位基因,PCR扩增产物可用琼脂糖凝胶电泳来鉴定。因此,采用SSP引物对样本DNA进行扩增之后,PCR扩增产物的有无是鉴定HLA等位基因的基础。
         
        提取待测标本基因组DNA
        采用SSP引物进行PCR扩增相应HLA基因
        扩增后进行琼脂糖凝胶电泳检查PCR产物
        根据PCR产物的出现进行待测标本的HLA型别判断
         
        PCR-SSP分型技术的优点为操作简单、快速,可借助自动化设备进行操作;结果直接在琼脂糖电泳凝胶上观察,判断容易,杂合子也容易检出;缺点是必须采用多对SSP引物进行扩增,而且对空气中DNA气溶胶污染比较敏感。
        【试剂配制和仪器要求】
        1 、主要试剂
        (1) 等位基因序列特异性引物(SSP)
         
        (2) dNTP
        (3) Taq多聚酶
        (4) β-actin基因引物,作为PCR反应的内参照,该引物的序列如下:
        5’-TACATGGCTGGGGTGTTGAA-3’
        5’-AAGAGAGGCATCCTCACCCT-3’
        (5) 琼脂糖凝胶电泳所需的材料和试剂
        2 、仪器设备
        (1) 可调加样器(1~10ul,10~100ul,100~1000ul)
        (2) PCR扩增仪
        (3) 琼脂糖凝胶电泳槽和电泳仪
        (4) 电泳凝胶观察系统或电泳凝胶图象分析系统
        (5) 涡旋震荡器
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