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        正常小梁细胞原代培养

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        1724
              实验材料:
              1.  材料来源:人眼、兔眼或者猪眼等;
              2.  清洗液:不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素,pH7.2;
              3.  器械:小梁剪与无齿镊等;
              4.  消毒液:200IU/ml的庆大霉素生理盐水;
              5.  培养液:基础液由DMEM培养基加入HEPES 6.0g/L、NaHCO3 2.2 g/L以及L-谷氨酰胺0.06 g/L配制而成。应用液是在基础液内补加15%的胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml,并用5% NaHCO3 调节pH至7.0—7.2;
              6.  培养器皿:培养瓶、24孔培养板或培养皿若干;
         
              实验方法:
              1.  将离体的供体眼球用200IU/ml的庆大霉素溶液浸泡消毒5min;
              2.  无菌条件下,沿角膜缘后5mm处环形剪开眼球,剪断晶状体悬韧带,去除晶状体和玻璃体;
              3.  将眼前段倒放在培养皿中,在显微镜下用无齿镊把虹膜抹离角膜内皮面,暴露房角结构。用角膜剪紧贴虹膜与巩膜的附着部位,剪除色素膜;
              4.  以PBS溶液或平衡盐溶液轻微冲洗小梁组织表面。用小梁剪伸入Schlemm管,楔形剪取小梁组织。前界至Schwalbe线,后界至巩膜嵴。环形取出一块小梁组织,置于培养皿中;
              5.  经PBS漂洗后将小梁组织剪碎,几乎成浆状;
              6.  用无齿镊挑起少许小梁组织,接种于24孔培养板后培养瓶皿中,轻轻铺平。待组织稍干后加入适量培养液,在CO2 培养箱静置培养。第四天后开始换液,每周2次。
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