🔥 DNA 提取的原理，步骤，优缺点总结

总结了用不同方法提取 DNA 的原理，步骤，还有各个方法的优缺点。

一般分为裂解和纯化两大步骤，裂解是破坏样本的结构，从而释放出 DNA；纯化则是去除体系中的蛋白质，盐及其他杂质。

用于 DNA 的提取。

1、氯仿抽提法

原理：

利用氯仿对裂解体系进行反复抽提，使蛋白质变性，以去除蛋白质，使 DNA 从核蛋白中游离出来，后续进行 DNA 纯化。

材料：

需要提取 DNA 的样本（常规的动植物组织，微生物），SDS 和 CTAB 等裂解液，氯仿，异丙醇，75% 乙醇，EP 管，移液器，离心机等。

步骤：

1）将适量研磨好的组织放入 1.5 mL 的 EP 管内，加入裂解液，轻轻涡旋混匀，60 ℃ 水浴 30~60 min（期间上下轻柔颠倒混匀几次）；

2）待冷却至室温，加等体积的氯仿，轻轻混匀，室温静置后离心；

3）拿出干净的 EP 管，加入适量的异丙醇（好处是不用换枪头，防止交叉污染）；

4）吸步骤 2）离心完的 EP 管里的上清到异丙醇中（尽量只吸取上清），轻轻混匀，置于 -20 ℃ 冰箱静置 15~20 min；

5）离心，弃上清，得到 DNA 沉淀，并用枪头吸干多余的异丙醇；

6）1 mL 75% 乙醇洗涤沉淀，离心，弃上清，顺势离心，用枪头吸出多余乙醇；

7）室温晾干，加入适量的 ddH₂O，待 DNA 溶解后置于 -20 ℃ 保存备用。

优缺点：

优点是成本低，缺点是使用了氯仿和异丙醇等有毒试剂，毒性较大，且得到的 DNA 回收率低，纯度低。

2、离心柱法

原理：

离心柱上有一层硅基质膜，在高盐低 pH 条件下，DNA 吸附于膜上，通过一系列的漂洗离心后，通过漂洗液等将细胞代谢物和蛋白质等杂质去除，最后在低盐高 pH 的条件下洗脱，释放出 DNA。

材料：

需要提取 DNA 的样本（血液/细胞/组织 DNA），试剂盒（离心柱型），离心机，移液器，无水乙醇等。

步骤：

1）平衡液预处理

取一个新的吸附柱放在收集管中，悬空滴加平衡液至离心柱中，离心，倒掉收集管中的废液，将离心柱放回收集管中，备用；

2）处理材料：如提取材料为血液，可直接使用新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液；贴壁培养的细胞和动物组织应先处理为细胞悬液，然后离心，弃上清，加入缓冲液 1，振荡至彻底悬浮；

3）加入蛋白酶 K，混匀：提取血液和细胞基因组时，只需加入蛋白酶 K 混匀，即可继续进行下一步；提取组织基因组时，加入蛋白酶 K 混匀，需在 56 ℃ 放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖和内壁的水珠，再进行下一步骤；

4）加入缓冲液 2，充分颠倒混匀，70 ℃ 放置 10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖和内壁的水珠；

5）加入水乙醇，充分振荡混匀 15 s，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖和内壁的水珠；

6）将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），离心，弃废液，将吸附柱放回收集管中；

7）向吸附柱中加入缓冲液 3（注意：使用前请确保已加入无水乙醇！），离心，弃废液，将吸附柱放入收集管中；

8）向吸附柱中加入漂洗液（注意：使用前请确保已加入无水乙醇！），离心，弃废液，将吸附柱放入收集管中；

9）重复操作步骤 8；

10）将吸附柱放回收集管中，离心，尽量去除漂洗液，将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；

11）将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位加适量洗脱液，室温放置 3~5 min，离心；将得到的溶液重新放回吸附柱中，室温放置 2 分钟，离心，收集 DNA ；

12）DNA 可以存放在 2~8 ℃，若要长时间存放，可以放置在 -20 ℃。

优缺点：

优点是提取到的 DNA 纯度高，价格相对低廉，操作便捷，缺点是使用的样本和耗材多，同时需要反复离心不便于自动化操作。

3、磁珠法

材料：

需要提取 DNA 的样本，磁珠，裂解液，洗涤液，离心机，移液器等。

步骤：

1）裂解：取研磨好的组织，放入 EP 管中，加入裂解液，使核酸从细胞或组织中释放出来；

2）结合：离心取上清，加入震荡混匀的磁珠结合液，颠倒混匀，将 EP 管置于磁力架上轻柔地颠倒混匀数次进行分离，然后离心，弃废液；

3）洗涤：加入漂洗液 1，轻柔地颠倒混匀数次进行磁分离，然后离心，弃废液；

4）洗涤：加入漂洗液 2，轻柔地颠倒混匀数次进行磁分离，然后离心，弃废液；

5）洗涤：重复步骤 4），吸净管盖及管底的废液，开盖，室温静置干燥；

6）洗脱：加入洗脱液，放置水浴锅中温育后磁分离，吸取上清到新的 EP 管中，进行下游实验。

优缺点：

优点是操作简单，用时短，能够实现自动化操作，安全无毒，DNA 得率高纯度高，灵敏度高；缺点是成本较高。

1、所有的离心步骤均在室温完成，均使用台式离心机；

2、DNA 纯化过程中进行洗涤时，尽量吸净管盖和管底的废液；

3、实验前将需要的水浴先预热到需要的温度备用；

4、洗涤结束后，要开盖室温放置数分钟，让液体挥发干净，否则会影响后续的实验；

5、样品需要避免反复冻融，否则会导致 DNA 的得率。

1、最终没得到 DNA，可能是漂洗液中没有预先加入无水乙醇；

2、DNA 得率低，可能是样本不新鲜或者样本经过反复冻融。