• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构：
    • 成为企业机构
    • 个人用户：
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        蚜虫核基因EF-1 alpha基因序列测定及系统发育分析

        互联网

        2007

        实验材料

         

        本研究中的蚜虫为桃蚜、豆蚜、棉蚜。桃蚜、豆蚜、棉蚜在实验室内分别用萝卜、菜豆、黄瓜进行饲养；各种群分别置于50×50×50的正方体铁架外罩100目双层沙网内，饲养条件为20-22℃相对湿度60-70%。

        实验步骤

         

        1. 蚜虫总DNA的提取

           1) 向事先已编号的1.5mL离心管内分别加入20ulSTE缓冲液(100mmol/LNaCl，10mmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH 8.0 )，然后分别将离心管置于冰上；

           2) 挑取新鲜单头成蚜虫放入离心管内，立即用塑料碾槌碾磨；

           3) 碾磨后将离心管置于冰上，重新取下一头成蚜虫放入另一个离心管内，重复第二步；

           4) 分别向离心管内加入1.6ul蛋白酶K (10mg/mL )；

           5) 简单离心后，37℃下孵育30min；

           6) 95℃初始变性5min；

           7) 简单离心后，-20℃保存或用2ul作为PCR反应的模板，立即进行PCR扩增。

        2. PCR扩增体系和条件

        使用一对特异性引物(Moran et al.，1999 )扩增蚜虫mtDNA-12S/16SrRNA基因。

        上游引物为：5’-GGAAATGGGAAAAGGCTCCTTCAAGTAYGCYTGGG-3'；

        下游引物为：5’-ATGTGAGCAGTGTGGCAATCCAA -3'。

        每50uL扩增反应体系含：2uL DNA模板，30.6uL ddH2 O，5uL l0Xbuffer，5uL MgCl2 (25 mmol/L)，4uLdNTPs ( l0mmol/L each)，0.4uLTaq DNA聚合酶(5U/u，大连TaKaRa公司)，上游和下游引物各1.5uL ( 20umol/L each )。

        PCR反应条件为：94℃预变性4min；接着92℃变性lmin，55℃退火1 min，72℃延伸1 min共30个循环。

        扩增产物的检测：取PCR反应产物5-9uL，在1.0%(g/mL)的琼脂糖凝胶上60V电压电泳30min，最后在Bio-Rad Gel Doc EQ凝胶成像系统下观察。

        3. 序列分析

        获得的DNA序列先提交到GenBank数据库中，然后利用“BLAST”，工具(NCBI站点)进行序列分析、DNA序列检索；用GenDoc软件进行序列同源性比较；用BioEdit软件进行序列编辑；用Clustal X软件(Thompson等，1997)进行序列比对(alignment )；比对结果输入MEGA2.1软件(Kumar等，2001)，采用距离法计算各样品间的遗传距离，并基于Kimura-2 Parameter模型，用邻接法(Neighbor-Joining，NJ)构建系统发育树，通过自展1000次检验获得系统树分支的置信度。

        ad image
        ad image

        相关产品推荐

        彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）

        彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）

        ￥1498

        Danio rerio (Zebrafish)eef1a ef1a重组蛋白表达

        Danio rerio (Zebrafish)eef1a ef1a重组蛋白表达

        ￥2000

        Integrin alpha V beta 3重组蛋白|Recombinant Human ITGAV & ITGB3 Heterodimer Protein (His Tag)

        Integrin alpha V beta 3重组蛋白|Recombinant Human ITGAV & ITGB3 Heterodimer Protein (His Tag)

        ￥1790

        葡萄糖摄取比色测定试剂盒，阿拉丁

        葡萄糖摄取比色测定试剂盒，阿拉丁

        ￥15599.90

        龙沙Lonza XS毕赤酵母蛋白表达系统 微生物酵母真核基因表达载体

        龙沙Lonza XS毕赤酵母蛋白表达系统 微生物酵母真核基因表达载体

        询价

        相关问答

        问

        端粒的定义及其在真核基因组中的意义？

        288 围观
        2024-01-11

        问

        单倍型系统发育树如何构建？

        3 回答 2273 围观
        2023-05-04

        问

        RUNX2和PGC1 alpha在WB检测中

        2 回答 758 围观
        2022-04-20

        相关方法

        雄性生殖系统发育分析实验

        放射性同位素标记的DNA序列测定分析

        转基因植物的分析

        推荐阅读

        系统发育分析

        蚜虫（Aphididae）

        蚜虫（Aphididae; aphids）

        无忧采购 轻松科研

        无忧采购 轻松科研

        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序