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        为离解型化合物开发可行的(rugged)HPLC方法的策略

        互联网

        1113

        为离解型化合物开发可行的(rugged)HPLC方法的策略

        J.J.Kirkland

        ~undefined使用了有机改性剂的方法为不理想但可行的方法。

                                碱性和酸性的化合物

                                     预先分离

        对低pH敏感的碱性化合物跳到步骤5 
                                     
        步骤1:使用C18、C8柱,使用20-50mM磷酸盐缓冲体系(pH=<3),调节乙腈百分比使得k为0.5-20,使用1.0ml/min的流速,如果峰扩散――跳到2

        如果拖尾――步骤1a
        步骤1a   增加20mM TEA或它的乙酸盐 

        弱保留碱性化合物――跳到1b
        步骤1b   用含有机改性剂的甲醇――加己烷磺酸,磷酸盐缓冲体系(pH=<3),如果峰扩散再跳到5   
                             
        步骤2 改变柱温,如果峰扩散 ――跳到2a,3

        步骤2a 
        以~5%(v/v)的幅度增加或降低乙腈百分比,如果峰扩散再跳到3

        步骤3 流动相改用甲醇或四氢呋喃做有机相,保持k为0.5-20,如果峰扩散――跳到3a,4

        步骤3a  改变柱温,如果峰扩散再跳到4

        步骤4 改变键合相,用腈基柱、苯基柱,重复步骤1、2、2a、3,和3a;如果峰扩散――跳到5

        步骤5 使用封端的sol-gel硅胶C18、C8柱,优化流动相:20-50mM有机缓冲体系(pH4-8),和20mM TEA,设置柱温=<40摄氏度,如果峰扩散――6;5a;5b


        步骤5a  重复2,2a,3,4;如果峰扩散――6

        步骤5b 对酸性物质,用含有机改性剂的甲醇――加TBA的磷酸盐,磷酸盐缓冲体系(pH=<3),调节甲醇比例使k为0.5-20,如果峰扩散――6

        步骤6 在步骤5的基础上,加入10-50mM氨基乙酸或硼酸缓冲(pH9-10),调节有机相比例使k为0.5-20,如果峰扩散――6a,7

        步骤6a  重复2,3;如果峰扩散――7

        步骤7  用其它HPLC方法

        译者注:TEA(triethylamine),三乙胺。
                TBA(tetrabutylammonium),四丁基铵。 
                Sol-gel,一种硅胶类型,纯度高,耐碱。
                封端:用小分子硅烷化试剂对填料进行二次键合,减少硅醇基,提高覆盖率,从而减少碱性物质拖尾。
                本文翻译自:38  LC&GC Asia Pacific VOLUME1 NUMBER2  June 1999,Practical Method Development Strategy

         for Reversed HPLC of Ionizable Compounds

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